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原发性肝癌（肝癌）的发病率在肿瘤中排第五，死亡率居于第三。在我国，超过80％的肝癌患者为HBV持续感染者。在HBV转基因鼠和乙肝患者中的报道都显示，NK细胞在HBV持续感染所诱发的肝脏炎症中发挥了重要作用。而大量研究证明炎症反应促进了肝癌的发生。因此，NK细胞可能参与了HBV相关肝癌的发生。杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killercellimmunoglobulin-likereceptor,KIR)是一系列表达在NK细胞和部分活化性T细胞表面的分子，已知的KIR配体主要为特定型别的经典人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen，HLA)Ⅰ类分子。KIR分子通过与其HLA配体结合，参与调节NK细胞或部分T细胞的活化。KIR分子和HLA分子都具有高度多态性，功能学实验和相关性研究都支持，KIR与HLA基因的多态性能够影响个体NK细胞的活性。
本课题的研究目标是探索KIR、HLA基因及其组合的多样性对HBV相关肝癌发生和发病年龄的影响。
采用病例-对照研究探索KIR、HLA基因及其组合与HBV感染者肝癌发生的相关性。按照年龄构成、性别比例匹配、同时去除其它肝炎病毒感染和饮酒等混杂因素的原则收集144例HBV感染的肝癌患者和189例HBV感染的非肝癌(88例肝硬化和101例慢乙肝)患者进行病例-对照研究。采用基于测序的分型方法对患者的HLA-A、-B、-C位点进行高分辨率分型，采用引物特异性PCR方法检测患者12个KIR基因。采用X2检验或Fishers精确概率法检测各遗传因素组间差异的显著性，并使用Bonferronis公式对多重检验后的p值进行校正。采用多因素Logistic回归进行多因素分析;采用Spearman相关检验进行趋势性检验。所有统计学分析均使用SPSS软件完成。结果如下:
1.HLA-B*35:01:01G与肝癌的发生相关（非肝癌组为0.6％，肝癌组为6.5％，p=0.003，pc=0.04，OR=12.49)，由于经典HLAI类分子在决定个体T细胞应答中发挥了重要作用，提示T细胞应答可能影响了HBV相关肝癌的发生。
2.KIR2DS4(f)+/(d)+的阳性率在慢乙肝、肝硬化、肝癌三组中依次增加（分别为11.9％、22.7％和27.8％），是疾病向肝癌进展的风险因素(Ptrend=0.004)。
3.HLA-Bw4I(非肝癌组为16.7％，肝癌组为34.8％，p=0.0002，pc=0.0008，OR=2.67)和HLA-Cl/Cl(非肝癌组为60.2％，肝癌组为75.2％，p=0.005，，pc=0.002，OR=2.02)的阳性率在肝癌组中显著升高，为肝癌发生的风险因素。
4.将KIR2DS4(f)+/(d)+、HLA-Bw4I和HLA-Cl/Cl的各种组合进行分析，发现HBV感染者携带这三者中的遗传因子越多，患肝癌的风险越大(Ptrend=7.4×10-5)。而KIR2DS4、HLA-Bw4I和HLA-Cl都参与调节NK细胞的活化，且均已被功能学实验证明会导致个体的NK细胞具有更高的活性或者能够促进NK细胞的活化，提示NK细胞（或表达KIR的其它细胞）活化导致的炎症反应可能在疾病从慢乙肝向肝硬化、肝癌的发生发展过程中发挥了重要作用。
为了探索KIR、HLA基因及其组合与HBV感染的肝癌患者发病年龄的相关性，招募215例HBV相关肝癌患者，同时收集患者性别、年龄、疾病基础、肝炎病毒感染指标、家族史、生活习惯等方面的信息。采用基于测序的分型方法对患者的HLA-A、-B、-C位点进行高分辨率分型，采用引物特异性PCR方法检测了患者12个KIR基因。采用KM生存分析、COX多因素分析和直接分层分析等方法系统分析了各HLA、KIR基因及其组合对患者发病年龄影响，结果发现:
1.HLA-A*02:06:01G是肝癌发病年龄提前的独立风险因素（发病年龄中位数阳性患者为47岁，阴性患者为50岁，p=0.02），提示T细胞应答可能影响了HBV相关肝癌发生的进程。
2.在肝硬化患者中，HLA-Cl/Cl-2DL2或HLA-Cl/Cl-2DS2是肝癌发病年龄提前的独立风险因素(发病年龄中位数阳性患者为44岁，阴性患者为52岁，HLA-Cl/Cl-2DL2,p=0.0001;HLA-Cl/Cl-2DS2,p=0.002)。
3.KIR2DS3是肝癌发病年龄提前的独立风险因素（发病年龄中位数阳性患者为49岁，阴性患者为52岁，p=0.01），且在女性中存在作用更加显著的趋势（女性中发病年龄中位数阳性患者为42岁，阴性患者为54岁，p=0.10），提示NK细胞（或表达KIR的其它细胞）的活化可能加快了HBV相关疾病向肝癌的进展。
本研究从HBV感染者是否发展为肝癌和肝癌的发病年龄这两个角度探索了KIR、HLA基因及其组合多态性对HBV相关疾病向肝癌进展的影响，结果都提示NK细胞（或表达KIR的其它细胞）的活化在疾病向肝癌的发生发展过程中发挥了重要作用。研究结果可能为发展以预防HBV感染者发生肝癌为目的的新策略提供线索，同时为针对我国HBV感染者制定更有效率的个性化的肝癌监测程序提供了新的思路和初步依据。