牛胚胎体外生产技术研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:qiuzhiye51
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本研究利用屠宰黄牛卵巢,对体外胚胎生产的主要环节进行了系列研究,旨在根据安徽当地的资源优势,因地制宜,建立合适的体外胚生产程序。研究结果如下:卵巢运输时,分别保存在30~38℃和20~25℃,12h左右带回,平均每个卵巢收集卵母细胞数分别为2.42枚和3.33枚,成熟率分别为70.75%和79.55%,差异均不显著(P>0.05);卵裂率分别为48.06%和65.21%,桑囊胚率分别为20.08%和30.12%,差异均显著(P<0.05)。去除卵丘卵受精后的卵裂率为32.33%,极显著低于卵丘完整的卵母细胞受精后的卵裂率63.21%(P<0.01),桑囊胚率不去卵丘卵显著高于去除卵丘卵(31.66%vs15.29%,P<0.05)。成熟液中添加0、10%、20%和40%的牛卵泡液(来自4mm以上卵泡),成熟率分别为73.28%、74.16%、69.88%和63.68%;40%添加组成熟率显著低于末添加组(P<0.05),其它各组间没有显著差异(P>0.05);添加组卵裂率及桑囊胚率均高于不添加组(P<0.05)。成熟液中添加0、10ng/ml、20ng/ml和50ng/ml的表皮生长因子,成熟率分别为75%、77.72%、82.96%和80.42%,各组间没有显著差异(P>0.05);添加组卵裂率及桑囊率均高于不添加组(P<0.05)。冻精采用上浮法和直接离心洗涤法处理,卵裂率分别为31.20%和63.81%,差异显著(P<0.05),桑囊率分别为22.82%和33.21%,差异显著(P<0.05)。无共培养时,分别用M199(添加10%FBS)、CRlaa(添加3mg/ml BSA)和SOFaa(添加3mg/ml BSA)三种培养基对体外胚进行培养,卵裂率分别为47.28%、63.15%和60.94%,囊胚率分别为0、15.52%和19.20%,囊胚孵化率分别为0、58.33%和62.50%,M199组显著低于其他两组(P<0.05)。与颗粒细胞共培养时,分别用M199(添加10%FBS)、CRlaa(添加3mg/ml BSA)和SOFaa(添加3mg/ml BSA)三种培养基对体外胚进行培养,卵裂率分别为48.20%、58.61%和59.78%,囊胚率分别为24.39%、22.37%和20.88%,囊胚孵化率分别为62.50%、66.67%和75%,各组间无显著差异(P>0.05)。屠宰场采集卵巢时根据供体牛的年龄大小将所采集的卵巢分为两组,青年牛(小于8月龄)和成年牛(大于8月龄),平均每个卵巢回收的卵母细胞数分别为2.50枚和4.02枚,成熟率分别为39.66%和87.27%,卵裂率分别为39.70%和71.37%,桑囊胚率分别为10.06%和31.81%,差异均显著(P<0.05)。总之,本研究建立了相对比较实用而且有效的体外胚生产程序:采集的卵巢保存于20~25℃生理盐水中,12h左右运回;卵母细胞成熟于M199,添加10%FBS、10%牛卵泡液或20ng/ml EGF中培养24h;冻精用Sp-TALP液(添加有3mg/ml BSA)进行上浮处理;精卵在IVF-TALP液(添加有10μg/ml肝素)共孵育18~20h;受精卵培养于SOFaa(添加3mg/ml BSA)直到发育到桑椹胚或囊胚。
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