论文部分内容阅读
目的:探究FOXO3a对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、增殖的影响。方法:本实验分为3组:空白组Control组(未处理的MDA-MB-231细胞组)、阴性对照组NC组(转染空载质粒的MDA-MB-231细胞组)、实验组FOXO3a组(转染FOXO3a质粒的MDA-MB-231细胞组)。1)MDA-MB-231细胞株分别转染FOXO3a质粒载体和空载体,构建高表达FOXO3a的细胞株和转染空载质粒的细胞株。2)采用蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测三组细胞中FOXO3a蛋白的含量判断FOXO3a是否转染成功。3)MTT法检测三组细胞在24h、48h、72h、96h四个时间点的增殖抑制情况。4)7-AAD/PI-Annexin V染色法流式细胞术检测各细胞株24h的凋亡情况。5)划痕实验检测三组细胞在0h、24h及48h的迁移能力。6)Transwell实验检测三组细胞在0h、24h及48h的侵袭能力。结果:1)Western Blot实验结果显示:FOXO3a蛋白在三组细胞中表达水平不同,FOXO3a组相对表达量明显高于Control组与NC组,有显著差异(P<0.05),而Control组与NC组的FOXO3a蛋白相对表达量无显著差异(P>0.05)。2)MTT实验结果显示:三组细胞的存活率各不相同,FOXO3a组的细胞增殖抑制率明显高于Contorl组(P=0.013<0.05)、NC组(P=0.012<0.05),差异有统计学意义;Contorl组与NC组无显著差异(P>0.05)。3)7-AAD/PE-Annexin V染色法流式细胞术实验结果显示:FOXO3a组细胞凋亡率(13.37±0.25)%明显高于Contorl组凋亡率(8.38±0.45)%与NC组凋亡率(9.18±0.23)%,差异有统计学意义(P<0.05);而Contorl组与NC组细胞凋亡率无显著差异(P>0.05)。4)划痕实验结果显示:三组细胞的划痕修复率有所差异,其中FOXO3a组划痕修复率(42.07±1.76%)明显低于Contorl组(48.73±1.25%,P=0.002<0.05)与NC组(48.27±1.6%,P=0.003<0.05),差异有统计学意义;而Contorl组与NC组无显著差异(P>0.05)。5)Transwell实验结果显示:三组细胞的侵袭能力有差异,FOXO3a组穿透Transwell膜细胞数(56.33±4.51)明显低于Contorl组穿膜数(80.24±5.57,P=0.011<0.05)与NC组穿膜数(92.43±3.51,P=0.007<0.05),差异有统计学意义,而Contorl组与NC组无显著差异(P>0.05)。结论:FOXO3a抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭,促进凋亡,可能在乳腺癌发生发展、转移侵袭中起抑制作用。目的:探究FOXO3a对乳腺癌细胞顺铂化疗敏感性的影响。方法:本实验分为6组:Control组、NC组、FOXO3a组、DDP(顺铂)组、DDP+NC组、DDP+FOXO3a组。1)MTT法检测不同浓度的顺铂(1μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml)作用MDA-MB-231细胞后24h、48h及72h的细胞增殖抑制率,筛选作用于乳腺癌细胞的最适顺铂浓度。2)7-AAD/PE-Annexin V染色法流式细胞术检测DDP组、DDP+NC组、DDP+FOXO3a组加入顺铂(20μg/ml)培养后的细胞凋亡率。3)MTT法检测顺铂(20μg/ml)处理后0h、24h、48h、72h、96h三组细胞的增殖抑制情况。结果:1)MTT法检测结果表明顺铂浓度的IC50为20μg/ml。2)流式细胞术检测结果表明DDP组细胞凋亡率(36.20±0.29)、DDP+NC组细胞凋亡率(35.54±0.72)及DDP+FOXO3a组细胞凋亡率(46.41±0.77)之间的差异有统计学意义(P<0.05),DDP组与DDP+NC组之间细胞凋亡率无显著差异(P>0.05)。3)MTT法检测结果表明DDP组、DDP+NC组与DDP+FOXO3a组之间的细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05),DDP组与DDP+NC组之间细胞存活率无显著差异(P>0.05)。结论:FOXO3a调高MDA-MB-231细胞顺铂化疗后凋亡率,可能与增强三阴性乳腺癌对顺铂化疗的敏感性有关。