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本研究以盘锦红海滩的翅碱蓬为试验材料,首先进行实时荧光定量PCR技术分析脱水素基因(&DHN)在盐胁迫条件下基因的表达量,验证启动子的类型,然后采用FPNI-PCR方法克隆SsDHN基因的启动子,运用生物信息学软件进行预测分析,然后根据启动子区域的作用元件进行缺失,构建缺失片段表达载体,再将缺失片段重组表达载体质粒通过农杆菌介导法转化烟草叶片,进行瞬时表达分析。结果如下:1.NaCl胁迫处理下翅碱蓬SsDHN基因表达分析将40 d的翅碱蓬幼苗在300 mM NaCl胁迫下处理不同的时间,qRT-PCR分析结果表明SsDHN基因在12h基因的表达量达到最高,基因在叶中表达量高于根,表达量表现为先上升后下降,研究结果表明SsDHN启动子是盐胁迫诱导型启动子。2.SsDH 基因全长、启动子序列的克隆和序列分析根据本课题组获得的SsDH cDNA序列,克隆得到了SsDH 基因全长,为1253bp,序列中包含一个两端的边界为GT-AG的560bp的内含子。采用FPNI-PCR法克隆到了872 bp启动子,进行PlantCARE分析表明,序列中含有一些保守序列TATA-box、CAAT-box 等,还包含一些如:ABRE、ARE、MRE、CCGTCC-box、CGTCA-motif、GC-motif、TCA-motif、TGACG-motif和MBSI与逆境胁迫相关的顺式作用元件等。3.构建缺失表达载体将获得的5’端缺失片段连接到TA载体上命名为:pMD18T-F1、pMD18T-F2、pMD18T-F3、pMD18T-F4,双酶切获得粘性末端的缺失片段与pCAMBIA1303质粒大骨架连接,构建了 4个重组表达载体分别命名为:SsDHNp1-GUS、SsDHNp2-GUS、SsDHN冲3-GUS、SsDHNp4-GUS,经PCR法、双酶切和序列比对验证重组表达载体构建成功。4.启动子的分析采用农杆菌介导法将缺失片段重组表达载体质粒转化烟草叶圆片,进行GUS瞬时表达分析,试验表明该启动子可能存在响应NaCl胁迫、MeJA、ABA、SA的顺式作用元件。