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目的:甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)是内分泌腺中十分普遍的恶性肿瘤之一,寻找意义明确的易感性生物标志对于PTC的早期发现及精准预防尤为重要。甲状腺乳头状癌是环境与遗传交互作用产生的后果,环境致癌因子所导致的DNA损伤是其发生发展的起始动力。由电离辐射引起的染色体DNA双链断裂在众多类型的DNA损伤中是最需要引起重视的致死性损害,而同源重组和非同源末端连接则是修复DNA双链断裂的两种主要机制。本研究通过生物信息学技术选取DNA双链断裂修复(DSBR)系统的关键酶基因,包括HR修复途径的RAD51、RAD51B、BRCA1、BRCA2以及NHEJ修复途径的XRCC4、XRCC5等作为候选靶基因,根据人群中MAF值筛选出位于这些靶基因3’UTR区的SNP。通过PTC病例-对照研究证明该SNP位点以及可能与其结合的miRNA与PTC发病风险的关联,体外实验验证候选miRNA对其靶基因的调控及miRNA结合位点SNP不同基因型对这种调控的影响。本研究为找寻意义确切的与PTC相关的易感性生物学标志,为PTC的早期诊断及精准治疗提供新的分子靶点及理论依据。研究方法:1、登录GeneCards网站根据关键词“Homologous recombination”、“Non-homologous End Joining”进行搜索,在结果中挑选与这两种DNA修复通路相关的基因。使用UCSC网站基因组浏览器查找基因3’UTR区中的SNP并利用MAF值筛选SNP。使用Targetscan、PolymiRTs等网站预测可能结合在所筛选SNP位点上的miRNA。2、使用Taqman水解探针法对206例PTC病例及206例健康对照的靶基因的候选SNP位点进行基因检测并分析这些SNP基因多态与PTC发病风险之间的关联。3、验证候选靶基因SNP不同基因型对miRNA与靶基因结合度的影响通过双荧光素酶报告基因法验证。细胞转染miRNA模拟物至人甲状腺上皮Nthyroi3-1细胞系后,real-time PCR检测miRNA对靶基因mRNA表达的影响,Western Blot检测miRNA对靶基因蛋白表达的影响。结果:1、通过生物信息学技术选取DSBR系统关键酶基因RAD51、BRCA1、BRCA2、XRCC4、XRCC5等作为本研究的候选基因。2、BRCA2 rs15869位点的基因多态性与PTC易感性相关,其CC基因型携带者比AA基因型携带者患PTC的风险高(OR=2.595,95%CI:1.091-6.171);CC基因型女性携带者比AA基因型女性携带者患PTC的风险高(OR=2.756,95%CI:1.024-7.414);在年龄小于50岁的人群中,CC基因型携带者比AA基因型携带者患PTC的风险高(OR=4.440,95%CI:1.177-16.444)。3、生物信息学预测miR-627-3p可能结合在BRCA2基因rs15869位点并改变其mRNA的二级结构。双荧光素酶报告基因法验证rs15869多态可以影响miR-627-3p在BRCA2 3’UTR的绑定能力。通过体外转染miR-627-3p模拟物后对BRCA2 mRNA及蛋白水平的检测,结果表明miR-627-3p的过表达降低BRCA2 mRNA和蛋白表达水平。结论:BRCA2 rs15869位点CC基因型与PTC易感性相关,C等位基因可增加PTC的患病风险。BRCA2基因rs15869位点不同基因型与miR-627-3p结合能力的差异改变其表达水平,从而影响PTC的发病风险。