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近些年,疫病的不断出现,成为制约养鸡业发展的重要因素,尤其是鸡大肠杆菌性腹泻大面积发生,传染性强,死亡率高。目前,鸡饲料中普遍使用亚治疗剂量的抗生素类添加剂抑制和杀灭病原菌,这给养殖业带来一系列问题。首先在杀病原菌的同时也抑杀了鸡体内正常共生的菌群,破坏了微生态平衡；其次使鸡体内的耐药病原菌或变异病原菌不断产生；更严重的是鸡不断向环境中排泄这些抗生素或其代谢产物,使环境中的耐药病原菌与变异病原菌不断出现。这迫使养殖户增加抗生素用药量,更新用药品种,从而造成了变异病原菌高耐药性,肠道微生态环境进一步破坏。大量研究表明微生态制剂可调整机体的微生态平衡,在防治腹泻的同时也避免了耐药性的产生,有着抗生素无法比拟的优点,非常具有发展潜力,世界各国陆续积极地倡导和推广,使其受到瞩目。本试验从健康青年鸡粪便中分离得到的300株产芽孢菌株中分离得到152株菌具有体外抗大肠杆菌活性,其中J-4菌株的抗菌活性最强。对该菌株进行了菌落、菌体、芽孢形态观察,生理生化鉴定和16SrDNA系统发育树的构建,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。微生态制剂分泌的抗菌肽具有较高抗菌活性、易降解等优点。本试验对J-4菌株的发酵液进行了分析,分别采用有机溶剂萃取,盐析,蛋白酶敏感性试验,酸耐受性试验,高温耐受性试验,初步断定该菌株分泌的抗菌物质是肽类。大多数益生菌在体外具有良好的抗菌活性,而到体内往往失效,其主要原因是消化道内的胃酸、胆盐、肠液,使菌体死亡。为了克服这些缺陷,对J-4菌株进行了胃酸、胆盐、肠液耐受性试验,在pH值为2.0环境中3h仍能存活90%,能够耐受0.3%的胆盐,在肠液中3h存活率为80%,适宜在消化道内存活和定植。J-4芽孢80℃保温70 min后仍有88%以上存活,有望成为益生菌菌株。为了提高防治腹泻的芽孢益生菌发酵液菌体浓度,对J-4菌株的发酵条件进行了优化,通过单因素试验和正交试验发现玉米粉为最佳碳源,花生饼粉为最佳氮源,MnSO4·H2O为最佳无机盐,确定J-4的最佳发酵条件为：玉米粉1%,花生饼粉2%,MnSO4·H2O 0.07%, NaH2PO4·2H2O 0.2%, Na2HPO4·2H2O 0.4%,初始pH 7.0,三角瓶装液量为30 mL/250 mL,接种量2%,摇瓶转速220 r/min,发酵温度37℃。培养条件优化后发酵液浓度显著提高：优化前发酵菌体浓度最高为2.23x108cfu/mL,优化后可达1.83x109cfu/mL,提高了7.2倍,而芽孢率在95%以上,为该菌的进一步研究与应用奠定了基础。将J-4菌株发酵液进行了小白鼠和雏鸡饲喂的安全性试验,15天后未发现小白鼠和雏鸡脏器、肠道的任何病变,证明此菌株为枯草芽孢杆菌安全菌株。为了进一步研究该菌的防治腹泻效果,建立了小白鼠大肠杆菌性腹泻模型,用J-4菌株发酵液进行饲喂,发现饲喂后小鼠盲肠内乳酸菌有益菌增多,而大肠杆菌等有害菌明显减少,试验组腹泻率和死亡率明显低于空白对照组；又建立了鸡的大肠杆菌性腹泻模型,J-4菌株对其进行了有效的预防和治疗。J-4益生菌株的抗鸡腹泻饲喂试验达到了良好的效果,为鸡大肠杆菌性腹泻的益生菌预防和治疗提供了新菌株。