全反式维甲酸对甲状腺相关眼病球后成纤维细胞增殖的影响

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目的:观察全反式维甲酸(all trans-retinoic acid,ATRA)对体外培养的球后成纤维细胞(retroocular fibroblasts,RF)增殖的影响以及ATRA诱导RF凋亡的作用。为ATRA应用于甲状腺相关眼病(Thyroidassociated ophthalmopathy,TAO)的治疗提供理论依据。方法:体外培养TAO患者RF细胞;将不同浓度的ATRA(0、10-9mmol/L、10-8mmol/L、10-7mmol/L、10-6mmol/L和10-5mmol/L)作用于RF细胞分别达24h、48h和72h后,于倒置相差显微镜下观察各时间段各组细胞形态学变化,并用噻唑蓝(MTT)比色法观察ATRA对细胞增殖的影响,采用流式细胞仪检测ATRA处理48h后细胞周期的改变及细胞凋亡的百分率;检测ATRA处理48h后细胞内bcl-2蛋白的表达水平。结果:体外培养的球后成纤维细胞生长良好,传代稳定,细胞呈梭形或分枝状,细胞培养24h后,倒置相差显微镜下观察各组细胞形态均无明显变化。10-9mmol/L药物组即使在72h后细胞形态仍未发现显著改变。10-8mmol/L、10-7mmol/L药物组培养72h后及10-6mmol/L、10-5mmol/L药物组培养48h后,可观察到部分细胞形态发生改变,细胞散在分布,形态变得不规则且折光性减弱,胞浆中出现颗粒样物质;72h后,10-6mmol/L、10-5mmol/L药物组细胞轮廓明显加深,细胞老化,生长停滞。MTT法显示ATRA能降低RF细胞的光吸收值(A值),细胞生长抑制率随作用时间和药物浓度的增加而增加。流式细胞仪检测ATRA作用于RF细胞后,将细胞周期阻滞在G1期;ATRA可诱导细胞的凋亡,随着浓度的增加凋亡率显著增高;流式细胞仪检测ATRA作用于RF细胞后bcl-2蛋白的表达水平较正常对照组细胞明显下调。结论:1.ATRA能够抑制RF细胞的增殖,其抑制细胞增殖作用具有时间和剂量依赖性;2.ATRA是通过将细胞阻滞在细胞周期的G1期而起到抑制RF细胞增殖的作用;3.ATRA可以诱导RF细胞凋亡,其诱导凋亡作用与下调细胞内bcl-2蛋白的表达有关。
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