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第一部分:巩膜上静脉注射高渗盐水联合不可预知性温和应激刺激诱导肝郁证慢性高眼压大鼠模型目的:通过巩膜上静脉注射高渗盐水结合慢性不可预知性应激刺激的方法获得肝郁证慢性高眼压大鼠模型。方法:将90只8～12周龄SPF级成年雄性SD大鼠随机分为空白组、高眼压组、肝郁高眼压组,各30只。空白组、高眼压组正常饲养4周,慢性高眼压组给予慢性不可预知性温和应激刺激4周,通过糖水偏好实验、旷场实验、血清皮质酮检测筛选肝郁证成模大鼠。于成模后,对肝郁高眼压组及高眼压组大鼠行左眼巩膜上静脉注射高渗盐水制作青光眼模型,眼压大于25mmHG连续持续7天以上为造模成功。于高眼压成模后第2、4周通过光学显微镜观察大鼠视网膜HE染色,透射电镜观察大鼠视网膜超微结构、通过数码医学图像分析系统进行视神经节细胞计数及视网膜厚度测量,比较各组大鼠眼压升高情况、视网膜病理学改变程度。结果:经慢性不可预知性温和应激刺激4周后,肝郁高眼压组大鼠体重、糖水偏好度、旷场实验穿格总距离明显低于其他组大鼠,血清皮质酮明显高于其他组大鼠,差异有统计学意义（P<0.05）;巩膜上静脉注射高渗盐水诱导慢性高眼压大鼠模型,大鼠眼压升高明显,有统计学意义（P<0.05）,且持续时间长、眼压水平稳定;高眼压组、肝郁高眼压组大鼠视网膜组织结构损伤明显,视神经节细胞数量均明显少于空白组,有统计学意义（P<0.01）;高眼压组、肝郁高眼压组大鼠视网膜均明显变薄,明显薄于空白组,有统计学意义（P<0.01）。第二部分:肝郁证慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞miRNAs表达特征（差异性表达）目的:通过观察大鼠视网膜病理学改变,利用miRNA芯片杂交、qRT-PCR验证等技术手段,筛选大鼠视网膜差异性表达的miRNA,研究肝郁证青光眼大鼠体质特征的病理基础,预测肝郁证青光眼的致病靶基因及相关通路。方法:将36只8～12周龄SPF级成年雄性SD大鼠随机分为空白组、高眼压组、肝郁高眼压组,各12只。空白组、高眼压组正常饲养4周;慢性高眼压组给予慢性不可预知性温和应激刺激4周,通过糖水偏好实验、旷场实验、血清皮质酮检测筛选肝郁证成模大鼠。于成模后,对肝郁高眼压组及高眼压组大鼠行左眼巩膜上静脉注射高渗盐水制作高眼压模型,眼压大于25mmHG连续持续7天以上为造模成功。于高眼压成模后第2、4周提取各组大鼠视网膜总RNA进行miRNA芯片杂交,筛选差异性表达的miRNA,并通过qRT-PCR验证,采用GO、KEGG富集性分析预测肝郁证青光眼的致病靶基因及相关通路。结果:成模两周后,经过miRNA芯片杂交、qRT-PCR验证,高眼压组、肝郁高眼压组大鼠视网膜组织中miR-184均差异性下调表达,肝郁高眼压组大鼠视网膜组织中miR-133b-5p特异性下调表达（P<0.05）;成模4周后,经过miRNA芯片杂交、qRT-PCT验证,高眼压组、肝郁高眼压组大鼠视网膜组织中miR-184均差异性下调表达,肝郁高眼压组大鼠视网膜组织中miR-133b-5p特异性下调表达、miR-1b特异性上调表达（P<0.05）。第三部分:疏肝通窍法对肝郁证高眼压大鼠视网膜miRNA表达的影响目的:观察通窍明目4号对肝郁证青光眼大鼠治疗后大鼠的视网膜病理学改变及miRNA的差异性表达,预测疏肝通窍法治疗肝郁证青光眼、保护视神经作用的靶基因及相关通路,为深入研究其作用机理提供理论支持。方法:将144只8～12周龄SPF级成年雄性SD大鼠随机分为空白组、肝郁高眼压组、中药组、神经营养剂组,各32只。空白组正常饲养4周;肝郁高眼压组、中药组、神经营养剂组给予慢性不可预知性温和应激刺激4周,通过糖水偏好实验、旷场实验、血清皮质酮检测筛选肝郁证成模大鼠。于成模后,对除空白组外其余三组大鼠行左眼巩膜上静脉注射高渗盐水制作高眼压模型,眼压大于25mmHG连续持续7天以上为造模成功。成模后中药组给予中药通窍明目 4号4g/kg·d,神经营养剂组给予维生素B1100mg/d、维生素B12 500μg/d,空白组、肝郁高眼压组给予相同剂量生理盐水,分别于治疗第二周、第四周通过光学显微镜观察大鼠视网膜HE染色,透射电镜观察大鼠视网膜超微结构、通过数码医学图像分析系统进行视神经节细胞计数及视网膜厚度测量,比较各组大鼠眼压升高情况、视网膜病理学改变程度;提取各组大鼠视网膜总RNA进行miRNA芯片杂交,筛选差异性表达的miRNA,并通过qRT-PCR验证,采用GO、KEGG富集性分析预测肝郁证青光眼的致病靶基因及相关通路。结果:治疗2周后,中药组大鼠眼压略低于神经营养剂组大鼠,差异无统计学意义（P>0.05）;中药组、神经营养剂组大鼠视网膜视神经节细胞数量、视网膜厚度略高于肝郁高眼压组,差异无统计学意义（P>0.05）;中药组、神经营养剂组较肝郁高眼压组大鼠miR-211-5p均差异性下调表达（P<0.05）,两组间无显著差异（P>0.05）;中药组miR-133b-5p特异性上调表达,差异有统计学意义（P<0.05）。治疗4周后,中药组大鼠眼压略低于神经营养剂组大鼠,差异无统计学意义（P>0.05）;中药组、神经营养剂组大鼠视网膜视神经节细胞数量、视网膜厚度明显高于肝郁高眼压组,差异有统计学意义（P<0.0 1）,两组间有显著差异（P<0.05）;中药组、神经营养剂组较肝郁高眼压组大鼠miR-1b均差异性下调表达,差异有统计学意义（P<0.05）,两组间无显著差异（P>0.05）;中药组miR-133b-5p特异性上调表达,差异有统计学意义（P<0.05）,神经营养剂组miR-181c-5p特异性上调表达。结论:1.首次通过巩膜上静脉注射高渗盐水结合慢性不可预知性应激能够成功诱导出肝郁证慢性高眼压大鼠模型,该模型大鼠的行为学、皮质酮等指标均符合肝郁证特点,且眼压升高持续时间长、眼压水平稳定、符合慢性高眼压视网膜损害特点。2.首次发现miR-184为高眼压及肝郁高眼压大鼠视网膜共同差异性表达的miRNA,miR-133b-5p、miR-1b为肝郁证慢性高眼压大鼠视网膜特异性表达的miRNA。生物信息学分析提示miR-184显著富集于视网膜细胞程序性死亡、视杆细胞的发展、视网膜发育等靶点;miR-133b-5p显著富集于视网膜细胞程序性死亡、谷氨酸分泌、炎性反应、肿瘤坏死因子TNF信号通路及长期抑郁等靶点;miR-1b显著富集于轴突目标识别、慢性炎症反应以及长期抑郁等靶点。3.通窍明目4号治疗肝郁证慢性高眼压大鼠差异性表达的miRNA为miR-133b-5p、miR-211-5p 与 miR-1b,其中 miR-133b-5p 为通窍明目 4 号治疗肝郁证慢性高眼压大鼠特异性表达的miRNA。生物信息学分析提示miR-211-5p显著富集于血管重塑的调节、神经视网膜的发展、肿瘤坏死因子TNF信号通路及STAT3通路等靶点。