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目的:食管癌(Esophageal Cancer)是消化道最常见的恶性肿瘤之一,它的发病率和死亡率在全球位居所有恶性肿瘤前列。我国是食管癌发生的最严重区域之一,中老年群体较多发,且男性的发病率高于女性。临床上食管癌呈现出两种病理组织类型:即腺癌(Esophageal Adenocarcinoma)和鳞癌(Esophageal Squamous cell carcinoma),其中后者较为常见,约占所有食管癌的80%。食管癌具有早转移、晚发现的特点,治疗手段以手术和放、化疗为主,但疗效并不理想、患者生存率低且复发率高,严重威胁着公共健康。因此,深入研究探讨其致病机理具有重要的公共卫生意义。microRNA(mi RNA)是一类内源性、非编码小RNA分子,能通过调控下游靶基因而参与多种肿瘤的生长、分化、转移等方面,在肿瘤的发生发展过程中发挥着十分重要的作用。miR-28-5p是一个具有多种生物学功能的microRNA,能够调控肾癌和结肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移,并与肝癌和卵巢癌发生发展过程关系密切。然而miR-28-5p在食管癌中的表达情况及作用机制还不清楚。基于此,本论文拟研究mi R-28-5p在食管癌组织中的表达情况并探索miR-28-5p及其靶基因肿瘤转移抑制子(Metastasis suppressor 1,MTSS1)在食管癌发生发展中的作用及相关机制。研究方法:1.收集新鲜食管癌及对应的癌旁组织各30例,qRT-PCR检测临床样本中miR-28-5p的表达水平。同样用qRT-PCR检测2种食管癌细胞中miR-28-5p的表达水平,并在转染miR-28-5p mimics或inhibitor后,用CCK-8试验、流式细胞术和western blotting分别检测它们对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。2.采用生物信息学方法、双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和wetsern blotting预测并鉴定miR-28-5p的下游靶基因。3.检测食管癌临床样本中MTSS1的表达水平,并将MTSS1过表达质粒与miR-28-5p mimics共转染TE-1细胞,再将MTSS1 siRNA与miR-28-5p inhibitor共转染细胞,CCK-8试验、流式细胞术和western blotting检测它们对细胞增殖和细胞周期的影响。4.皮下注射食管癌细胞TE-1建立裸鼠移植瘤模型,经注射miR-28-5p antagomir治疗后,观测裸鼠瘤体体积、组织病理学及MTSS1表达的变化情况,western blotting检测细胞周期相关蛋白(cyclin A、cyclin D1、cyclin E和CDK2)及凋亡相关蛋白(caspase3和caspase9)的表达。结果:1.与正常癌旁组织相比,miR-28-5p在食管癌组织中的表达显著升高,且在2种食管癌细胞株中也上调表达。上调食管癌细胞中miR-28-5p的表达能显著促进细胞的增殖、促进细胞由G1期向S期转化及抑制细胞凋亡;mi R-28-5p下调表达则抑制细胞的增殖、抑制细胞由G1期向S期转化并促进细胞凋亡。2.生物信息学方法预测MTSS1是miR-28-5p的潜在靶点,双荧光素酶报告基因系统鉴定、qRT-PCR和western blotting结果表明,MTSS1是miR-28-5p的下游靶基因,miR-28-5p与MTSS1 3’-UTR区互补结合。转染miR-28-5p mimics后,MTSS1的mRNA和蛋白表达水平显著降低;转染miR-28-5p inhibitor后,MTSS1的mRNA和蛋白表达水平显著升高。3.与癌旁组织相比,MTSS1在食管癌组织中的表达显著下降。MTSS1过表达质粒与miR-28-5p mimics共转染TE-1细胞后,细胞增殖能力显著降低,表明MTSS1过表达能逆转miR-28-5p对细胞增殖的促进作用,并促进凋亡;此外,MTSS1的敲减能逆转miR-28-5p抑制剂对癌细胞生长的抑制作用,并抑制凋亡。4.与对照组相比,注射mi R-28-5p antagomir能显著减小荷瘤裸鼠肿瘤瘤体体积,能使肿瘤细胞核萎缩并减少细胞数量而抑制癌细胞的增殖。另外,注射miR-28-5p antagomir还可显著上调裸鼠内MTSS1蛋白的表达,减少Ki-67的表达,通过下调cyclin A、cyclin D1、cyclin E和CDK2的表达并上调caspase3和caspase9的表达而使荷瘤裸鼠体内癌细胞发生G1细胞周期阻滞,最终促进肿瘤细胞凋亡。结论:miR-28-5p在食管癌中的表达上调,MTSS1是它的靶基因,miR-28-5p的表达与MTSS1的表达呈负相关,mi R-28-5p通过抑制MTSS1的表达而促进食管癌的细胞增殖和瘤体生长。