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注意缺陷多动障碍（Attention Deficit Hyperactivity Disorder,ADHD）,又名儿童多动症。近来Sonuga-Barker结合目前对单胺类神经递质在ADHD发病中的认识,提出了“双通路”模型,被认为是目前较好的ADHD心理—病理—生理模型。该模型强调持续性主动注意力障碍和冲动行为在ADHD发病中的中心作用,执行功能障碍（EDF）和“厌恶延迟”（DEL）共同构成ADHD发病的心理—病理基础。在病理生理上,EDF主要因调控前额叶皮质—背侧纹状体环路的相关DA能分支——中脑—皮质束（MC）和黑质—纹状体束（NS）紊乱所致,主要病理位置在前额叶皮质和背侧纹状体（尾状核）;而DEL则是调控前额叶皮质—腹侧纹状体的“犒赏”环路的相关DA能分支——中脑—边缘束（ML）功能改变所致,主要病理位置在前额叶皮质、腹侧纹状体和伏核。儿童多动症患病率高,危害大。目前,中枢兴奋剂是西医治疗ADHD的首选,其虽可在短中期内使注意缺陷、多动、冲动等症状得到一定程度的控制,但不良反应较多,且有效剂量的个体差异性较大,停药后反跳快、复发率高;作为管制药物,潜在的成瘾性作用也使医患双方有诸多顾虑。近二十多年来,国内中医界开始应用中医药治疗ADHD。大多数学者认为本病的病机主要是脏腑阴阳失调,阴静不足而阳动有余,与心、肝、脾、肾最为密切。国内多家报道都肯定了中医药治疗ADHD的功效,并发现其疗效与中枢兴奋剂大致相当,虽然起效慢,但长期疗效肯定,且未发现明显毒副反应、反跳少,也无成瘾作用。虽然各家使用的方药有所差异,但我们分析多篇报道后发现:孔圣枕中丹是治疗ADHD的基本方剂。该方为唐代孙思邈所创制,功补心肾,长于潜镇安谧,益智强志。由于技术和伦理学的限制,在人体上开展疗效机理的研究非常困难,动物实验就成为重要的替代途径。国内学者在此方面进行了初步探索,发现中药治疗能减少实验动物的自主活动,改善其学习、记忆障碍,不过这些方法存在明显缺陷:动物模型研究缺乏明确的神经病理定位,虽然对实验动物的中枢DA含量及其代谢产物进行了检测,但由于缺乏合理的神经心理-病理-生理模型指导,实验取材全脑组织,考虑到DA在中枢不同部位的作用并不相同,其结果难以确定中医药治疗ADHD的具体作用机制。显然,此缺陷严重限制了动物实验的研究,相关的药效实验也难以开展,极大地影响了有效药物的开发和在临床上的应用,成为ADHD研究中急待突破和解决的关键问题。一、研究目的本课题选择中医药治疗ADHD的代表方剂——孔圣枕中丹,研究其对ADHD动物模型自发性高血压大鼠（SHR）中枢前额叶皮质—基底神经节环路的神经递质DA的信号传导的影响,明确孔圣枕中丹在动物实验中的疗效,深入探索中医药治疗ADHD的具体机制。二、研究内容和方法本课题运用目前国际上公认的ADHD动物模型——自发性高血压大鼠（SHR）,取SHR大鼠双侧中枢调控前额叶皮质—基底神经节环路的DA神经主要分布区域:前额叶皮质和豆状核,运用免疫组化和分子生物学技术来检测孔圣枕中丹对前额叶皮质和豆状核酪氨酸羟化酶、多巴胺转运体、多巴胺受体（包括DRD1和DRD2）的基因表达和蛋白表达的影响。并与中枢兴奋剂盐酸哌甲酯对照:1、把SPF级,8周龄,体重为240—300g的雄性SHR大鼠,随机分成三组,称重后,分别用孔圣枕中丹、盐酸哌甲酯和生理盐水按照一定的药物/体重比计算每只老鼠的灌胃体积（毫升）,灌胃4周后,进行下一步实验。2、免疫组化法检测孔圣枕中丹作用下SHR大鼠前额叶皮质、豆状核TH、DAT、DRD1、DRD2蛋白表达特征。3、蛋白免疫印迹法检测孔圣枕中丹作用下SHR大鼠前额叶皮质、豆状核TH、DAT、DRD1、DRD2蛋白表达特征。4、原位杂交法检测孔圣枕中丹作用下SHR大鼠前额叶皮质、豆状核TH、DAT、DRD1、DRD2基因表达特征。5、荧光定量PCR法检测孔圣枕中丹作用下SHR大鼠前额叶皮质、豆状核TH、DAT、DRD1、DRD2基因表达特征。三、研究结果:1.免疫组化法和蛋白免疫印迹法显示,SHR大鼠前额叶皮质和豆状核中酪氨酸羟化酶蛋白的表达,孔圣枕中丹组比盐酸哌甲酯组高,盐酸哌甲酯组又比生理盐水对照组高;多巴胺转运体的表达盐酸哌甲酯组比孔圣枕中丹组高,且两者均低于生理盐水对照组。2.免疫组化法和蛋白免疫印迹法显示,SHR大鼠前额叶皮质多巴胺受体（包括D1和D2）和豆状核受体D1的蛋白表达,孔圣枕中丹组比盐酸哌甲酯组要高,且两者均比对照组低;豆状核的多巴胺受体D2的蛋白表达,盐酸哌甲酯组要比孔圣枕中丹组高,且均低于对照组。3.原位杂交和荧光定量PCR表明,SHR大鼠前额叶皮质和豆状核中酪氨酸羟化酶基因的表达,孔圣枕中丹组比盐酸哌甲酯组高,盐酸哌甲酯组又比生理盐水对照组高;多巴胺转运体的基因表达盐酸哌甲酯组比孔圣枕中丹组高,且两者均低于生理盐水对照组。4.原位杂交和荧光定量PCR表明,SHR大鼠前额叶皮质的多巴胺受体（包括D1和D2）和豆状核受体D1的基因表达,孔圣枕中丹组比盐酸哌甲酯组要高,且两者均低于对照组;豆状核多巴胺受体D2的基因表达,盐酸哌甲酯组要比孔圣枕中丹组高,且均低于对照组。四、研究结论:1.孔圣枕中丹能改善ADHD动物模型的核心症状是通过影响调控中枢前额叶皮质-基底神经节环路的DA神经信号传导来实现。2.孔圣枕中丹促进DA的合成来改善ADHD动物模型的核心症状是通过多靶点、多作用途径来实现的:（1）增加DA合成限速酶——酪氨酸羟化酶（TH）的含量,促进DA的生物合成及突触前末梢DA的释放;（2）影响多巴胺转运体的基因表达和蛋白表达,从而减少DA的重摄取;（3）影响DA受体（包括D1和D2）的基因表达和蛋白表达,上调中枢DA的功能。