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Mx基因是Lindenmann在研究A2G小鼠抗流感病毒试验时发现的,因能抵抗粘液病毒而命名为Mx(myxovirus resistant)基因。关于禽类Mx蛋白的研究,1992年首次发现了鸭的Mx蛋白后,鸡的Mx蛋白基因也被克隆,鸡的Mx蛋白的抗病毒活性受2032位点单核苷酸引发631位氨基酸改变的影响,当631位氨基酸为天冬酰胺时有抗病毒活性,为丝氨酸时则无抗病毒活性。本研究通过PCR-RFLP对我国不同品种鸡Mx基因2032位点单核苷酸多态性进行检测;构建EGFP-Mx融合表达载体,转染NIH-3T3细胞观察Mx蛋白的细胞亚定位,同时进行体外抗VSV病毒试验。旨在探索Mx蛋白的细胞分布情况及其抗病毒活性。主要研究结果如下:1.研究采用错配PCR-RFLP的方法对15个品种鸡的Mx基因进行筛查,旨在探索不同鸡品种Mx基因第2032位点抗病基因(A)与易感等位基因(G)的多态性,为生产转基因鸡的可行性提供理论基础。研究结果显示,15个鸡品种Mx基因的2032位点存在2个等位基因(A、G),3种基因型(AA、AG、GG),其中鹿苑鸡、狼山鸡、斗鸡未发现AA型个体,茶花鸡、红色原鸡未发现GG个体;携带Mx抗性基因(A)和易感基因(G)的比例分别是0.350,0.650;抗性等位基因A的检测比例为0.034～0.984。红色原鸡的抗性等位基因A基因频率(0.984)显著高于地方鸡种的抗性等位基因A的基因频率(0.321);地方鸡种中的观赏型、蛋肉兼用型、肉用型、蛋用型鸡种的抗性等位基因A的基因频率分别为0.221、0.297、0.425、0.462。χ2适合性检验表明15个品种的鸡群均处于Hardy-Weinberg平衡状态。2.设计引物去掉报告基因EGFP的终止密码子,两端加上酶切位点(EcoR V、Xba I),用高保真酶扩增出EGFP基因。将该PCR产物与T载体连接,酶切测序鉴定正确后,双酶切连接产物获得EGFP基因,将其插入真核表达载体pcDNA3.0-MMx中,构建重组表达载体EGFP-Mx,经PCR、酶切鉴定验证构建正确后,提取并纯化。采用电穿孔法转染NIH-3T3细胞,转染后48 h用荧光倒置显微镜观察,同时RT-PCR鉴定其表达。结果显示了构建了EGFP-Mx融合表达载体,转染到NIH-3T3细胞后48 h通过荧光倒置显微镜可以明显看出绿色荧光分布于细胞质中。3.为了验证鸡Mx蛋白的抗病毒能力,用VSV病毒株攻击细胞的进行抗病毒效应试验。VSV抗性试验表明:在0.01TCID50 VSV对细胞感染48 h后,正常NIH-3T3细胞全部病变;而转染EGFP-Mx基因结合EGFP和G418双筛选的NIH-3T3细胞在感染后48 h未发生病变。.这表明Mx蛋白对VSV病毒有很强的抗病毒活性。