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背景胰腺癌是恶性程度最高的肿瘤之一，其预后很差，发病率与病死率几乎持平。胰腺癌的早期诊断困难，现有的治疗效果欠佳，因此迫切需要寻找新的治疗靶点。microRNAsR约19-2324个核苷酸，是一类小分子的单链RNA，由Drosha的酶和Dicer酶剪切发夹结构样RNA的前体后生成。microRNA与靶mRNA的3’非翻译区（3’-UTR）的分子通过互补配对使靶mRNA分子的翻译被抑制或导致特异性的mRNA分子的切割，在转录后水平调控靶基因的表达。大量的研究表明，microRNA小分子RNA参与调节机体的许多基本生命过程中，在生命活动的中扮演着非常重要的角色。近年microRNAs在肿瘤的诊断和治疗中的作用越来越受到关注。大量研究表明miR-148a的表达水平与胰腺癌的发生发展、生存期密切相关。但是多数研究集中于组织表达水平的比较，对于其在胰腺癌发病机制的研究较少。为了揭示miR-148a在胰腺癌发生过程中起了什么作用，我们拟采用生物信息学的方法预测miR-148a的可能的下游调控基因，并用分子生物学方法加以验证，为胰腺癌的诊断和治疗寻找新的方向。目的1.了解miR-148a在对胰腺癌发生发展中的作用。生物学特性的影响。2.在胰腺癌细胞株中寻找miR-148a可能的下游目的基因。3.观察通过siRNA抑制靶基因对胰腺癌细胞株的作用，并与过表达miR-148a对胰腺癌细胞株的作用进行比较。方法1.运用四唑盐（MTT）比色计数实验了解miR-148a对胰腺癌细胞株PANC-1、BXPC-3增殖的影响。2.运用transwell实验了解miR-148a对胰腺癌细胞株PANC-1、BXPC-3迁移的影响。3.运用生物信息学方法预测miR-148a调控的目的基因，构建含目的基因的3’-UTR的荧光素酶报告质粒。4.检测荧光素酶活性，确定miR148a是否直接与靶基因3’-UTR结合.运用聚合酶链式反应RT-QPCR检测转染效率。5.用western蛋白免疫印迹方法和实时定量pcr方法在改变miR-148a水平后检测靶基因蛋白和核酸表达的变化。6.在胰腺癌细胞株中转染目的基因的干扰RNA,了解目的基因对胰腺癌细胞增殖、迁移能力的影响7.结果1． miR-148a类似物可以抑制胰腺癌细胞株PANC-1、BXPC-3的增殖和迁移能力。增殖能力方面：在胰腺癌细胞株PANC-1、BXPC-3中，从转染后12小时开始，过表达miR-148a的细胞活性降低，持续到48小时，在48小时时降低最明显。迁移能力方面：PANC-1转染miR-148a组中，平均每个视野为迁移的细胞数是46.67±3.3，对照组为146.7±17.6（p＜0.05）。在BXPC-3中，对照组每个视野迁移细胞数为263.7±27.1。转染miR-148a后，每个视野迁移细胞数为171.3±8（p＜0.05）。2． miR-148a类似物可以抑制胰腺癌细胞株PANC-1、BXPC-3的迁移能力2．生物信息学发现ErbB3和miR-148a上有一个保守的结合靶位点；3． miR148a直接与ErbB3的3’-UTR结合，使得荧光素酶活性下降：过表达miR-148a导致荧光素酶活性倍数比阴性对照显著下降，下降倍数为0.25±0.047（p＜0.01），干扰组较其阴性对照组也有升高（p＜0.05）。而突变位点后，抑制解除，荧光素酶活性无明显差异。4．过表达miR-148a后，胰腺癌细胞株PANC-1、BXPC-3细胞中ErbB3蛋白水平和信使RNA水平均下降。蛋白水平，采用Image J灰度值测定软件对条带亮度及宽度进行分析，发现在PANC-1和BXPC-3细胞系中，过表达miR-148a后灰度值下降3倍，抑制miR-148a后灰度值升高1.5倍。信使RNA水平过表达miR-148a或干扰miR-148a均可影响ErbB3基因的mRNA水平。过表达miR-148a，ErbB3基因的mRNA水平下降。干扰miR-148a，ErbB3基因的mRNA水平升高（p＜0.05）。5．转染ErbB3干扰RNA后，胰腺癌细胞株的增殖、迁移能力下降。转染siRNA后，ErbB3基因的mRNA和蛋白水平均明显下降，p＜0.05。增殖能力方面：我们发现在PANC-1和BXPC-3细胞系中抑制ErbB3后，以转染分别在24h,48h，72h分别进行MTT检测细胞活性。从转染后48小时开始，转染ErbB3的siRNA的一组细胞活性降低，持续到72小时。迁移能力方面：敲除ErbB3的siRNA组的肿瘤细胞PANC-1、BXPC-3的迁移能力明显减弱（p＜0.05）。6．过表达miR-148a对胰腺癌细胞株的抑制作用略优于直接siRNA干扰ErbB3基因的作用。ErbB3蛋白水平上，在miR-148a处理中，下降倍数明显高于siRNA处理（p＜0.05）。；过表达miR-148a后，胰腺癌细胞株PANC-1、BXPC-3细胞中ErbB3蛋白水平下降。转染ErbB3干扰RNA后，胰腺癌细胞株的增殖、迁移能力下降。过表达miR-148a对胰腺癌细胞株的抑制作用略优于直接siRNA干扰ErbB3基因的作用。结论1. miR-148a在胰腺癌细胞株有抑制增殖和迁移的作用。2. miR-148a可能通过直接靶向调控ErbB3发挥肿瘤抑制作用。3.抑制ErbB3表达可以抑制胰腺癌细胞株的增殖和迁移能力。但过表达miR-148a对胰腺癌细胞株的抑制作用略优于直接siRNA干扰ErbB3基因的作用。4.