PRRSV LV毒株N基因克隆与原核表达的研究

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:nizhongyu
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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)于20世纪80年代中期在世界上首次被发现,此病每年给世界的养猪业造成的世界损失达几十亿美元,间接损失难以计算.我国于1996年首次分离到PRRS病毒,最近几年,该病在我国的发病率呈明显上升趋势,给我国的养猪业仅2000年直接损失达几十亿元人民币,间接损失难以估计,使我国的养猪业的遭受到极大的打击,尤其,最近几年,有的现地反应,在应用PRRSV疫苗后,效果不理想,母猪和仔猪仍有发病,提示我们,国内可能存在PRRSV的变异株或有PRRS欧洲型的存在。本研究以期利用分子生物学方法获得一种PRRSV LV毒株的检测抗原,为我国猪群PRRSV流行病学调查及猪群检疫提供一种成本低、敏感性高和特异性好的诊断试剂。 本研究根据GenBank发表的PRRSV LV毒株的基因序列,设计了一对扩增PRRSV LV毒株N基因的一对引物,利用RT-PCR方法,从PRRSV LV毒株的细胞培养物中成功的扩增出PRRSV LV毒株的N基因,该基因全长387碱基,与国际PRRSV欧洲型毒株的N基因序列的同源率为100%;随后,将该基因与原核表达载体pGEX-6P-1连接,然后转化到宿主菌BL21中进行表达。结果证实;PRRSV LV N基因成功地进行了原核表达,表达的目的蛋白占菌体总蛋白含量的20.8%。本实验的完成,为PRRS欧洲型的诊断抗原的制备及为我国猪群PRRSV欧洲型流行病学调查及猪群检疫提供一种成本低、敏感性高和特异性好的诊断试剂奠定了基础。
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