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目的:利用肺炎衣原体(Chlamdia pneumoniae,C.pneumoniae)体外感染血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)模型,观察 C.pneumoniae 感染对 VEC 迁移和血管新生的影响;探讨IQGAP1-N-WASP信号通路在C.pneumoniae感染诱导VEC迁移和血管新生中的作用。方法:1.C.pneumoniae增殖培养后体外感染VEC;2.采用Western blot技术检测C.pneumoniae感染的VEC内IQGAP1蛋白的表达水平;3.免疫共沉淀法检测C.pneumoniae感染后IQGAP1的磷酸化水平;4.CCK-8 检测 Src抑制剂 PP2 以及 PKC 抑制剂 GF 109203X 和 chelerythrine 在使用浓度及作用时间内对VEC活力的影响;5.免疫荧光法确定PP2、GF109203X以及chelerythrine在使用浓度及作用时间内对C.pneumoniae感染率的影响;6.分别用PP2、GF 109203X和chelerythrine预处理后,免疫共沉淀法检测C.pneumoniae感染后IQGAP1酪氨酸和丝氨酸磷酸化水平的变化;7.用PP2、GF 109203X和chelerythrine分别抑制IQGAP1的酪氨酸和丝氨酸磷酸化,wound-healing实验和Transwell实验与微管腔实验观察各组VEC迁移能力和血管新生能力的改变;8.肌动蛋白聚合实验观察C.pneumoniae感染VEC 后 IQGAPI1 与肌动蛋白的功能性定位;9.免疫共沉淀确定IQGAP1与N-WASP之间的相互作用;10.应用RNA干扰技术IQGAP1 表达水平下降,Western blot 检测IQGGAP1的蛋白表达以确定干扰效能;11.应用RNA干扰技术使IQGAP1表达水平下调,共聚焦显微镜观察C.pneumoniae感染后VEC内肌动蛋白和N-WASP的共定位情况,Western blot检测C.pneumoniae感染后VEC 中N-WASP磷酸化水平。结果:1.C.pneumoniae感染VEC后各个时间点的IQGAP1蛋白表达水平与0 h比较无明显变化;2.C.pneumoniae感染VEC 10 h和24 h后,IQGAP1丝氨酸和酪氨酸磷酸化水平均明显高于正常对照组(P<0.05),感染后24hIQGAP1丝氨酸磷酸化水平高于10 h(P<0.05),而10 h和24 h时间点之间的酪氨酸磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05);3.CCK-8实验结果显示,分别与正常对照组相比1 μmol/LPP2、1 μmol/L GF 109203X和5 μmol/Lchelerythrine在作用时间内对VEC活力无明显影响,差异均无统计学意义(P>0.05);4.使用 PP2、GF 109203X 以及 chelerythrine 预处理的各组 VEC 的C.pneumoniae感染率无明显差异,而且此感染率与C.pneumoniae感染组相比均无统计学差异(P>0.05);5.感染24 h后,C.pneumoniae感染+ PP2组VEC的IQGAP1酪氨酸磷酸化水平明显低于单纯C.pneumoniae感染组,差异有统计学意义(P<0.05),C.pneumoniae感染 + GF 109203X 组以及C.pneumoniae感染 + chelerythrine组VEC的IQGAP1丝氨酸磷酸化水平也均明显低于单纯C.pneumoniae感染组(P<0.05);6.Wound healing 实验结果显示,PP2、GF 109203X 和 chelerythrine 预处理的C.pneumoniae感染组VEC向划痕中央迁移的面积明显小于单纯C.pneumoniae感染组(P<0.05)。Transwell 实验结果显示,PP2、GF 109203X和chelerythrine预处理的C.pneumoniae感染组 VEC穿模细胞数明显低于单纯C.pneumoniae感染组(P<0.05),差异有统计学意义;微管腔形成实验结果农明,与正常对照组相比,C.pneumoniae感染后VEC形成微管腔结构的能力明显增强(P<0.05),但是,经PP2、GF 109203X和chelerythrine预处理后C.pneumoniae感染的这种效效应则明显减弱(P<0.05);7.C.pneumoniae感染后VEC内肌丝聚合,且在细胞"leading edge"处聚集增多;IQGAP1聚集于肌丝聚合处,呈重合状态;8.C.pneumoniae感染VEC 10 h后,免疫共沉淀结果显示,在65 kDa处出现明显的蛋白条带,符合N-WASP蛋白的分子量大小;9.siRNA转染后48 h,三个浓度组的IQGAP1蛋白表达水平均明显下降,分别为正常对照组的18.27%、17.33%和17.18%;10.共聚焦显微镜观察,C.pneumoniae感染后VEC内肌丝聚合,N-WASP与肌丝共定位于细胞"leading edge"处,而沉默IQGAP1的表达后该效应受到抑制。与正常对照组相比,C.pneumoniae感染组N-WASP磷酸化水平明显升高(P<0.05),而沉默IQGAP1的表达后,N-WASP磷酸化水平则显著降低,低于C.pneumoniae感染组(P<0.05)。结论:C.pneumoniae感染可能是通过促使IQGAP1的酪氨酸位点和丝氨酸位点发生磷酸化诱导VEC迁移进而促进血管新生;IQGAP1可能通过磷酸化的N-WASP发挥其在C.pneumoniae感染诱导VEC迁移和血管新生中的作用。