变形斑沙雷氏菌(Serratia proteamaculans)336X菌株能抑制由子囊菌禾顶囊壳小麦变种(Gaeumannomyces graminis var．tritici，Ggt)侵染根部所引起的小麦全蚀病(take—allof wheat)，具有开发成生防制剂的潜力。从分子水平上探索336X的生防机制，研究生防细菌与植物之间的相互作用，具有重要的理论和现实意义。　　 在本研究中，用变形斑沙雷氏菌568菌株基因组中一个预测的ABC转运系统相关基因设计引物phyF/R，以336X基因组DNA作为模板，通过PCR扩增出全长1569bp的完整ORF片段。扩增片段用载体pMD—18T克隆，经过测序分析，发现该片段和568菌株预测的4’—phytase同源，同源性指数为94％，故将该基因命名为phy。保守域序列分析表明，预测氨基酸序列和周质可溶性结合蛋白家族Ⅱ(PBP2_NikA_DppA_OppA_like_7)同源，相似性达15—21％。通过信号肽预测程序SignalP3．0 Server分析，发现在N端有一段31个氨基酸的信号肽序列，成熟肽链可能在27—28位氨基酸处切开。　　 为了研究phy的功能，将phy片段插入自杀性载体pKAS32，并用卡那霉素抗性片段中断，构建同源双交换敲除载体pKAS2—phy—km。通过接合作用将该质粒从大肠杆菌(Escherichia coli，E．coli)S17—1导入336X中，PCR检测得到3株phy缺陷型突变株。通过一系列的表型实验，发现突变株摄取Ni2+的能力下降，表明phy可能编码Ni2+运输过程中的Ni2+结合蛋白组分。同时发现突变株的生防能力下降，对小麦根部分泌物的应答减弱，在小麦根表的定殖数量减少。这些结果可能有助于我们分析336X的生防机制。　　 为了进一步研究phy性质，将phy的ORF序列插入pET—30a中构建异源表达载体pET30a—phy，将该载体导入到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。结果发现经过异丙基—β—D—硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导，一个约60 kD的重组蛋白得以表达。对诱导条件进行了优化，发现最适的条件为：0．5 mmol/L IPTG于28℃下诱导5 h。表达的包涵体蛋白通过超声破碎、6 mol/L盐酸胍溶解后，变性条件下用Ni2+—NTA亲和柱纯化，及梯度复性得到可溶性蛋白。本研究为蛋白的序列分析，结构鉴定及活性部位研究等奠定了基础。