目的:对蜂蜡的质量标准进行研究,确定蜂蜡质量标准研究所使用的方法,建立适合的质量评价标准,草拟出蜂蜡的质量标准,为蜂蜡的质量控制及蜂蜡质量标准的修订提供依据。方法:1.深入各地收集蜂蜡药材共计13批,其中伪品1批,挑选10批作为本次实验使用药材。2.蜂蜡的性状鉴别实验:通过对10批蜂蜡的形状外观进行观察,同时使用显微镜对蜂蜡进行了简单的显微鉴别,记录10批蜂蜡的外观性状及显微鉴别结果。3.蜂蜡的理化鉴别实验:3.1相对密度、熔点、折光率测定方法:分别采用《中国药典》2010版附录ⅦA、ⅦC、ⅦF的方法对10批蜂蜡药材的相对密度、熔点、折光率进行测定。3.2酸值的测定方法:取蜂蜡适量置于锥形瓶中,用三氯甲烷溶解,加入酚酞指示液。用氢氧化钠做为滴定液,采用酸碱滴定的方法进行滴定。待锥形瓶中的溶液变为粉红色且持续不褪即可,记录所消耗的氢氧化钠的体积,采用酸值的计算公式计算结果3.3碘值的测定方法:取蜂蜡适量用三氯甲烷溶解,加入适量溴化碘和碘化钾溶液。用硫代硫酸钠溶液作为滴定液滴定上述混合液,同时做空白实验的。记录蜂蜡实验和空白实验消耗的滴定液体积,按照碘值的计算公式计算结果。3.4皂化值的计算方法:取适量蜂蜡置于经氧化钾溶液中,加热回流,然后用盐酸做为滴定液进行滴定。同时做空白实验:即不加蜂蜡供试品按照上述方法制备溶液并滴定。记录蜂蜡实验和空白实验消耗的盐酸滴定液,按照皂化值的计算公式计算结果。4.蜂蜡检查项标准的实验方法:采用常见的理化方法对蜂蜡中可能含有的地蜡、石蜡、重金属、砷盐等杂志进行检查,确定检查方法和检查标准,填补蜂蜡质量标准检查项空白。5.有效成分的含量测定实验:蜂蜡中二十八烷醇和三十烷醇是蜂蜡的主要有效成分,其含量的多少对蜂蜡药材的质量优劣具有重要的意义。本实验采用气相色谱的方法对10批蜂蜡药材中的二十八烷醇和三十烷醇进行了检测。确定二十八烷醇和三十烷醇检测的色谱条件,记录测定结果,根据结果制定了蜂蜡中二十八烷醇和三十烷醇的最低含量限度。6.蜂蜡指纹图谱的研究实验:中药指纹图谱的研究是近年中药质量标准研究的热点。本实验使用气相色谱的方法测定了10批蜂蜡的指纹图谱并对结果进行分析,建立蜂蜡的对照指纹图谱,为蜂蜡药材的鉴别提供新的参考方法。结果:1.性状鉴别结果:10批次蜂蜡性状鉴别结果全都符合2010版《中国药典》对蜂蜡性状的检查结果要求。2.理化鉴别结果:2.1相对密度:本品的相对密度范围为0.950-0.965.2.2熔点:本品的熔点范围为63℃～67℃。2.3折光率:本品的折光率在80℃时为1.4415～1.4430。2.4酸值:本品的酸值范围为5.5mg/g-5.7mg/g。2.5碘值:本品的碘值范围为8.50g/100g-11.10 g/100g。2.6皂化值:本品皂化值为85.00mg/g-105.00 mg/g。3.检查项结果:3.1地蜡、石蜡和脂肪类物质的检查结果:实验结果表明10批次蜂蜡中均不含有地蜡、石蜡、脂肪类的杂质。3.2重金属项目的检查结果:10批次蜂蜡的重金属检查结果均符合药典附录ⅨE第二法对检查结果的要求。3.3砷盐项目的检查结果:10批次蜂蜡的砷盐检查结果均符合药典附录ⅨF第二法对检查结果的要求。4.含量测定结果:蜂蜡中二十八烷醇的含量应不低于0.15%,三十烷醇的含量应不低于9%。5.指纹图谱实验结果:在全国10个产地蜂蜡的指纹图谱中,总共获得11个比较稳定的共有峰,不同产地的蜂蜡,共有峰的相对保留时间变化较小,RSD均小于1%,相对峰面积的大小差别很大。在以1号甘肃兰州产地蜂蜡作为参照图谱计算相似度结果中,除了3号蜂蜡和7号蜂蜡相似度分别为0.713和0.675比较低外,其它均有良好的相似度。这表明甘肃兰州产地的蜂蜡与其它7个产地蜂蜡在化学成分上有更好的一致性,功效上也会有较大的相似性。结论:本课题研究蜂蜡质量标准各个项目的方法科学科学合理,基本符合药典对质量标准实验方法的要求。各个项目的实验结果合理有效,能够为蜂蜡的质量控制提供一定的标准,同时能为蜂蜡质量标准的修改制订提供实验依据。