顺铂对胃癌细胞株MGC803增殖、凋亡的影响及分子机制的研究

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目的:探讨顺铂(Cisplatin,CDDP)在体外对胃癌细胞株MGC803增殖、凋亡的影响及其作用机制,为寻求新的胃癌治疗策略提供理论依据.方法:采用体外细胞培养技术,将CDDP分为三个作用浓度:0.1mg/L、1mg/L、10mg/L,用MTT法检测三组药物作用于MGC803细胞12h、24h、48h、72h后的吸光值,观察各浓度CDDP对胃癌细胞增殖的影响;采用AO/EB荧光染色检测药物作用后各时间点细胞凋亡率,观察CDDP对细胞凋亡的影响;流式细胞仪测定不同的浓度CDDP作用48小时后细胞周期变化;RT-PCR检测小剂量CDDP(1 mg/L)作用于MGC803细胞前后凋亡相关基因p53、survivin mRNA的表达变化.用SKN-q检验进行统计分析,取检验水准α=0.05.结果:MTT及荧光染色结果显示:CDDP可抑制胃癌细胞株MGC803的增殖、并诱导其发生凋亡.高浓度的CDDP(10mg/L)对此胃癌细胞系的作用有较强的时效依赖关系,随着时间的延长,其抑制增殖、诱导凋亡作用越强;而低浓度的CDDP(0.1mg/L,1mg/L)在作用24小时后,对细胞增殖的抑制减弱,细胞凋亡率无明显改变.流式细胞检测结果显示,不同浓度的CDDP作用于MGC803细胞48h后,细胞周期均发生了明显的改变,表现为,S期比率增加,G2/M期下降,随着药物浓度的增加,CDDP对细胞周期的影响越明显,具有量效依赖关系.RT-PCR检测结果显示,MGC803细胞经低浓度的CDDP(1mg/L)作用后,p53、survivin mRNA在干预后12h、24h、48h表达增强,与对照组相比,差异均具有显著性(p<0.05).p53mRNA在干预后12h开始表达增强,24h达高峰,接近于对照组的3倍,48h有所下降,其表达约为对照组的2倍;survivin mRNA表达从药物干预后12小时开始持续增强,且具有明显的时间依赖性,作用后48h其表达接近于对照组的3倍.结论:CDDP可抑制MGC803细胞增殖、诱导其凋亡;高浓度的CDDP(10mg/L)对此细胞系的作用具有时效依赖性,低浓度CDDP(0.1mg/L,1mg/L)在作用24小时后,对细胞增殖的抑制减弱,细胞凋亡率无明显改变;低浓度CDDP(1mg/L)可诱导MGC803细胞p53、survivin表达增加,抵抗化疗药物诱导的细胞凋亡.
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