【摘 要】
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本论文以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象,运用茎环法克隆了凡纳滨对虾的9个microRNA;通过注射副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)研究9个microRNA的表达情况,
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本论文以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象,运用茎环法克隆了凡纳滨对虾的9个microRNA;通过注射副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)研究9个microRNA的表达情况,根据表达情况,从中筛选了3个表达差异较大的microRNA,即miR-182-5p、miR-184和miR-750;并通过注射microRNA mimics和inhibitor影响3个microRNA(miR-182-5p、miR-184和miR-750)的表达来检测其对细胞凋亡、活性氧含量(ROS)、酯酶等免疫指标的影响。研究结果如下:1.注射副溶血弧菌1.5 h后,let-7a-5p、miR-107、miR-184、miR-184-3p、miR-375、miR-375-3p和miR-750的表达量均出现不同程度的上调,于24 h达到峰值;注射副溶血弧菌3 h后,miR-7和miR-182-5p也开始显著上调,并持续到实验结束。检测miR-182-5p、miR-184和miR-750在不同组织的表达情况,发现miR-182-5p、miR-184和miR-750均在肝胰脏、鳃和眼柄等组织中均有高表达。2.探索了0.3、3和30 ng的microRNA mimics和inhibitor的注射剂量下,对miR-184表达量的影响,结果表明,30 ng的注射剂量,能够影响miR-184的表达。3.通过注射30 ng剂量的microRNA mimics和inhibitor,流式细胞术检测血细胞的凋亡率,血淋巴ROS产量、酯酶活性等关键生理指标。结果发现miR-182-5p、miR-184和miR-750注射microRNA mimics后,在一定程度上提高了细胞的凋亡率;miR-182-5p可显著提升ROS水平,miR-184和miR-750则显著降低了ROS产量;所有处理组的酯酶活性均显著降低。初步验证了3个microRNA的具有调节凡纳滨对虾的细胞凋亡、血细胞活性氧产量和酯酶活力等生理过程。
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