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目的:运用生物信息学技术和现代生物工程技术以p IDO基因为研究目标,探讨p IDO基因的表达调控机制及该基因在NK细胞对猪内皮细胞杀伤中的调节机制。方法:首先运用生物信息学技术获取并分析p IDO基因5′调控区,预测可能存在的调控位点。构建7个不同长度启动子缺失片段和含有荧光素酶报告基因的重组质粒,分别将其转染至293细胞,运用荧光素酶报告基因检测系统检测各组转染细胞提取液的荧光强度,根据试验结果确定p IDO基因的关键调控序列。人工合成p IDO的c DNA序列,构建慢病毒表达载体p LVX-m CMV-Zs Green-PGK-Puro-IDO,并将其转染至猪内皮细胞系构建高表达p IDO基因的稳转细胞系。将稳转细胞系与NK92细胞混合培养,运用流式细胞术和TUNEL法对NK细胞杀伤稳转细胞系的能力进行评估。运用ELISA法和real-time PCR方法检测NK92细胞的IFN-γ和LFA-1表达强度,评估NK92细胞的活化水平。结果:生物信息学分析显示p IDO基因启动子区含有57个转录因子结合位点。运用双酶切和DNA测序的方法对构建的报告质粒进行鉴定。结果显示,缺失突变体荧光素酶报告质粒构建成功。运用荧光检测分析发现p IDO基因5′调控区存在多处调控区域,其中转录起始点上游-1035~-903bp和-481~-378bp区域的缺失对荧光素酶活性的影响最明显。成功构建高表达p IDO基因的稳转猪内皮细胞系(PED-IDO)。稳转细胞系可以抵御NK92细胞的杀伤作用,检测发现,将NK92细胞与PED-IDO细胞混合培养后,其活化水平明显降低,IFN-γ和LFA-1表达强度均明显下调。结论:p IDO基因转录起始点上游-1035~-903bp和-481~-378bp区域存在重要的调控序列。p IDO基因通过抑制IFN-γ,LFA-1的表达和抑制NK92细胞活化的方式介导PED细胞逃逸NK92的杀伤作用。