【摘 要】
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坦布苏病毒可引起鸭子产蛋量大幅度下降,同时伴有食欲下降,运动障碍,高热等临床症状,死亡率5%~20%。在2010年前后,本病在我国南方的浙江、上海、江苏一带大范围流行,引起了养
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坦布苏病毒可引起鸭子产蛋量大幅度下降,同时伴有食欲下降,运动障碍,高热等临床症状,死亡率5%~20%。在2010年前后,本病在我国南方的浙江、上海、江苏一带大范围流行,引起了养鸭业的巨大经济损失。到目前为止没有有效的治疗方法,疫苗接种是防控坦布苏病毒病的主要措施。2010年上海奉贤分离的FX2010株与马来西亚早期分离株MM1775对小鼠的致病力差异明显,MM1775对小鼠的致病力高于FX2010。前人研究表明,二者在E蛋白的Domain I区域(EDI)上存在9个氨基酸差异。为了解坦布苏病毒EDI区域第二位氨基酸与病毒致病性的关系,本研究通过引物进行定点突变构建单点突变质粒,使其表达的第二位氨基酸由MM1775株原来的的天冬酰胺(N)改变为和FX2010株相同的丝氨酸(S)。以该突变质粒和另外3个MM1775株的片段质粒为模板进行体外PCR扩增、获得4段PCR产物后进行融合,制备了全长cDNA,经体外转录成为具有感染作用的RNA,再将此RNA转染DF-1细胞,拯救出单点突变病毒rMM1775-EDI-N2S。小鼠感染试验表明,拯救的rMM1775-EDI-N2S突变病毒对小鼠仍然呈现高致病性,与原病毒rMM1775对小鼠的致病力相同,表明坦布苏病毒EDI区域第二位氨基酸不是导致FX2010与MM1775在小鼠上产生致病力差异的氨基酸位点。本研究成果对进一步深入进行坦布苏病毒致病性研究和疫苗研究具有一定参考价值。
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