高血压是导致脑中风、慢性肾功能衰竭、心肌梗死等病症的主要因素之一,已经严重影响到人类身体健康。市场上防治高血压的药品主要有硝苯地平、卡托普利、复方降压片等,但是由于其副作用严重,如会引起皮疹、心跳缓慢或过快、干咳等症状,因此人们愈来愈崇尚更健康的治疗方式。血管紧张素转换酶（ACE）对血压的调节起着重要的作用,而源于食物蛋白质的降血压肽可以通过抑制ACE酶的活性,进而降低人体血压。因降血压肽具有专一性、安全性、效果好且无副作用,渐渐成为学者的研究热点。近年来,国内外的研究者主要通过蛋白酶水解食源性蛋白质制备和鉴定降血压肽。由于降血压活性肽在酶解产物中的比例较小,且分离纯化困难和产率低等,限制了降血压肽的工业化制备。基因工程技术的快速发展为降血压肽的生产带来的巨大的前景。本课题以降血压肽WQVLPNAVPAK（Trp-Gln-Val-Leu-Pro-Asn-Ala-Val-Pro-Ala-Lys）为母体肽,将通过PCR扩增后的重组降血压肽的基因ACEIP与表达载体p ET30a相连,构建重组质粒p ET30a-ACEIP,化转至大肠杆菌BL21（DE3）后构建E.coli BL21（DE3）/p ET30a-ACEIP工程菌。对重组降血压肽ACEIP的诱导表达、分离纯化和降血压效果等进行了研究。主要的研究内容及结论如下:1.选择经体外ACE抑制试验和自发性高血压大鼠（SHR）动物实验证实有降血压效果的的肽WQVLPNAVPAK,根据胰蛋白酶的酶切位点串联形成降血压肽多聚体ACEIP,并转换成基因序列。根据大肠杆菌的偏好性,对组成降血压肽ACEIP基因序列的密码子进行了优化并合成。目的基因ACEIP与表达载体p ET30a分别通过双酶切、纯化回收和T4连接酶连接,构建了重组质粒p ET30a-ACEIP,转化后获得表达工程菌E.coli BL21（DE3）/p ET30a-ACEIP。该重组菌经过菌落PCR和测序,证实工程菌表达的基因序列ACEIP与设计的基因一致,且无错峰和移码。2.将构建的重组菌株E.coli BL21（DE3）/p ET30a-ACEIP用IPTG诱导其进行表达,同时研究表达条件:培养基、诱导时间、IPTG诱导浓度、诱导温度对其表达量的影响。用Tricine-SDS-PAGE进行测定和分析。电泳图显示相较于空质粒表达工程菌和未用IPTG诱导的工程菌,经过IPTG诱导的工程菌E.coli BL21（DE3）/p ET30a-ACEIP在相对分子质量约为8.7 k Da的地方出现了明显的条带,与设计的目的基因大小一致,Western Blot进一步表明重组降血压肽ACEIP成功的在E.coli BL21（DE3）中进行了表达。通过优化工程菌的发酵条件和正交实验,得最佳的培养条件是:以LB作为后续实验所用培养基,在IPTG浓度为0.8 mmol/L,温度为37℃,时间为8 h的条件下,重组降血压肽ACEIP的表达量最高占菌体总蛋白的38%。3.研究了重组降血压肽ACEIP的分离纯化过程。由于重组降血压肽ACEIP以包涵体形式表达,所以用洗涤液Ⅰ和Ⅱ、溶解液对其进行了处理,然后用Ni2+亲和层析纯化,用BCA法对纯化获得的重组降血压肽进行了浓度测定,结果显示可从1 L的工程菌发酵液中获得61.30 mg的重组降血压肽。将纯化所得的降血压肽溶液经过梯度复性、1×肠激酶酶切缓冲液透析、重组肠激酶酶切后,再次通过镍柱亲和层析吸附除去了组氨酸和肠激酶标签,获得了纯的重组串联降血压肽且其纯度为90%以上,其表达量为57.84mg/L。将其用胰蛋白酶酶切后,通过反相高效液相色谱测定了酶解液中单体WQVLPNAVPAK的含量为50.00 mg/L。4.研究了重组降血压肽ACEIP的体外ACE抑制活性。以马尿酰-组氨酸-亮氨酸作为反应底物,通过HPLC测定生成的马尿酸含量,对酶解多肽的体外ACE抑制率进行了测定。结果表明胰蛋白酶酶解多肽的IC50为6.39 mg/m L,并且体外胃肠模拟消化试验显示重组多肽ACEIP经过胃肠蛋白酶消化后,其水解液也具有较高的ACE抑制率,达到70%以上,表明重组降血压肽ACEIP可经过胃肠蛋白酶的作用释放出活性降血压片段,从而降低血压。