背景胰腺癌是恶性程度极高的消化系统肿瘤,预后极差。胰腺癌对化疗不敏感,其治疗效果不佳。近年来有研究发现,经典降糖药二甲双胍能够增加胰腺癌化疗敏感性,改善胰腺癌病人生存期,但其机制仍不清楚。目的本研究拟观察二甲双胍增加胰腺癌吉西他滨化疗敏感性,探索其中可能的机制,为二甲双胍联合吉西他滨治疗胰腺癌提供理论依据。方法体外细胞实验及体内裸鼠皮下成瘤实验检测二甲双胍对胰腺癌吉西他滨药物敏感性的影响,形态学观察此过程中细胞表型变化,Western Blot分析EMT相关蛋白水平变化。重亚硫酸盐修饰PCR及TA克隆测序检测二甲双胍处理前后,胰腺癌细胞miRNA甲基化水平及其对miR-663表达水平的影响。CCK-8检测miR-663对胰腺癌吉西他滨药物敏感性的影响及此过程中细胞表型变化。miRNA靶基因软件、荧光素酶报告基因实验、定量PCR、Western Blot等验证miR-663靶基因。使用miR-663 inhibitor降低miR-663表达量,证实二甲双胍通过此途径增加吉西他滨药物敏感性。结果体外细胞实验及体内裸鼠皮下成瘤实验结果提示,相较于吉西他滨单药组,二甲双胍联合吉西他滨显著抑制胰腺癌细胞增殖及皮下成瘤。吉西他滨诱导胰腺癌细胞后,细胞间连接减少,伪足增多,分子标志物E-cadherin表达量减少,Vimentin表达量增加,细胞出现EMT现象,而二甲双胍联合吉西他滨处理胰腺癌细胞后,上述EMT趋势受到抑制。探索上述现象机制,发现二甲双胍处理胰腺癌细胞后,miR-663启动子区甲基化比例下调,miR-663表达水平升高。胰腺癌细胞过表达miR-663,再次使用吉西他滨药物处理,发现相较于对照组,miR-663过表达组细胞增殖进一步受到抑制,miR-663逆转吉西他滨所致的胰腺癌细胞EMT现象。miRNA靶基因预测软件及荧光素酶报告基因实验提示miR-663与TGF-β1 3’-UTR存在靶向配对关系。定量PCR、Western Blot检测发现miR-663过表达组TGF-β1的m RNA及蛋白水平明显下调。最后,我们通过miR-663 inhibitor降低miR-663表达量,使用二甲双胍处理胰腺癌细胞时,不再影响吉西他滨对胰腺癌细胞的抑制作用。结论体外及体内实验证实二甲双胍增加胰腺癌吉西他滨药物敏感性,二甲双胍能够逆转吉西他滨所致的胰腺癌细胞EMT现象。二甲双胍能够下调胰腺癌细胞miR-663启动子区甲基化比例,增加miR-663表达水平。miR-663能够增加胰腺癌吉西他滨药物敏感性,并逆转吉西他滨所致的胰腺癌细胞EMT现象。荧光素酶报告基因实验、定量PCR、Western Blot等证实EMT相关基因TGF-β1为miR-663靶基因。上述结果表明二甲双胍通过下调miR-663启动子区甲基化比例,增加miR-663表达水平,逆转细胞EMT,增加胰腺癌吉西他滨敏感性。