甘油二酯是油脂中的天然成分,其具有普通食用油(主要成分为甘油三酯)相似的外观、风味以及营养价值;此外,甘油二酯还具有减少人体内脏脂肪、降低血脂和抑制体重增长等保健功能。甘油二酯的制备分为化学法和酶法,其中酶促甘油解是制备甘油二酯极具前景的方法。疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase/Humicola lanuginosa lipase,TLL/HLL)是一种热稳定性好的微生物脂肪酶,但是作为游离脂肪酶,TLL容易失去活性且难以回收和重复利用,不利于规模化应用。将酶固定化可大大增加酶的操作稳定性,其中载体的选择尤为重要。SBA-15介孔材料具有六方孔结构,表面积大,机械和热稳定性好,孔径窄,含有丰富的硅羟基,可通过硅烷偶联引入不同的有机基团以增加负载酶的稳定性,是极具优势的脂肪酶载体。本论文系统而深入地研究了有机基团修饰前后的SBA-15负载TLL固定化酶的酶学性质,以及其催化甘油解制备甘油二酯的特性。本论文将研究内容分为两个部分:1)SBA-15直接负载TLL的酶学性质及甘油解制备甘油二酯研究。结果表明,与Lipozme TLIM作相比,SBA-15直接负载TLL(SBA-15-TLL)具有良好的水解活性和较高的甘油解活性,但操作稳定性较低。SBA-15-TLL水解反应最佳条件为:固定化溶液pH为5.0,固定化时间为15 min,酶液蛋白浓度为66.71μg/mL时,酶活达到2862.78U/g。SBA-15-TLL甘油解反应最佳条件为:温度为60℃时反应时间为3小时,无溶剂体系时甘油二酯含量达到58.60%。2)有机功能基团修饰SBA-15后负载TLL(R-SBA-15-TLL)的酶学性质和催化甘油解制备甘油二酯的研究。结果发现,与Lipozme TL IM和SBA-15-TLL相比,R-SBA-15-TLL具有更好的的水解活性、热稳定性和重复利用性。(?)(?)的酶活均超过10000U/g,其中(?)的酶活高达14283.33 U/g;(?)在正己烷体系中加热4h后酶活仍可保持其初始酶活的80%左右。(?)重复五次反应后仍保持其初始酶活性的60%。此外,有机功能修饰使得负载酶对pH敏感性降低,在较宽的pH范围内能保持较高的水解酶活性。结果发现,(?)催化甘油解效果最好,甘油二酯含量达59.19%,其催化甘油解在60℃反应2小时后甘油二酯含量最高;(?)催化五次反应后仍保持其甘油解初始酶活性的95.21%,具有较好操作稳定性。同时对其进行XRD,XPS,FT-IR,TEM,SEM等结构表征,表明有机基团成功修饰SBA-15,并已负载TLL,且有机基团修饰及其负载酶之后仍保留其六方孔结构。本研究先对SBA-15-TLL和R-SBA-15-TLL的水解活性和甘油解活性进行探索。与Lipozme TLIM相比,(?)具有较高的水解活性和甘油解活性,以及良好的操作稳定性,为TLL的固定化及其催化制备甘油二酯提供理论基础和技术支撑。