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目的:通过实验研究探讨电针傍刺促进大鼠压疮模型(缺血再灌注损伤)创面愈合的作用;利用PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂wortmannin阻断此通路,从基因、蛋白层面动态持续观察PI3K/AKT信号通路下游因子的表达变化水平,探讨电针傍刺促进压疮创面愈合可能的机制。方法:第一部分电针傍刺对大鼠压疮模型创面收缩率及愈合时间的影响:采用随机数字表将18只SD大鼠分为模型组(Model group,M)、电针傍刺组(EA group,EA)及电针抑制剂组(EA+wortmannin group,EA+W),每组6只大鼠。采用大鼠皮肤缺血-再灌注损伤构建大鼠压疮模型。M组造模前及每日干预前10min,给予等量生理盐水腹腔注射,造模后给予碘伏擦拭,抓取固定30min。EA组,造模前及电针傍刺治疗前10min,给予等量生理盐水腹腔注射。造模成功后抓取固定,给予电针傍刺治疗。选取创面中心及距创面边缘0.5cm处各针刺一针,不施手法,连接电针仪,负极在内,正极在外,电流强度为500pA,每次治疗30min,1次/d;EA+W组,造模前及电针傍刺治疗前10min,腹腔注射wortmanninl.4mg/Kg[106].电针傍刺治疗同EA组;持续动态观察各组大鼠创面收缩率及创面愈合时间;第二部分基于PI3 K/AKT信号通路探讨电针傍刺调控压疮模型愈合的可能机制:150只SD大鼠随机分为空白组(Blank group,B)、模型组(Modelgroup,M)、电针傍刺组(EAgroup,EA)、电针抑制剂组(EA+wortmannin group,EA+W)及抑制剂组(wortmannin group,W)共五组,每组30只大鼠。M组、EA组、EA+W组造模及干预方法同第一部分。B组,给予等量生理盐水腹腔注射,其他组干预时同等条件下捆绑固定30min;W组,造模前10min及每日干预前,给予腹腔注射wortmannin1.4mg/Kg,同等条件下抓取固定30min,给予碘伏擦拭。各实验组又按干预时间不同分为Id、3d、5d、7d、9d组5个实验亚组。相应干预时间结束后取创面组织,行HE染色、免疫组化、qRT-PCR、Western Blot方法检测压疮组织中各因子的表达。结果:第一部分:各组创面收缩率比较:各实验组1d组之间无明显差异,无统计学意义。与M组比较,EA组创面收缩率在3d、5d、7d、9d组均明显优于M组(P<0.05或P<0.01)。EA+W组创面收缩率,除1d组外均低于EA组(P<0.01)。创面愈合时间比较:EA组创面愈合时间(8.83 ± 0.88)d明显少于M组(11.25±1.33)d,且有统计学意义(P<0.01)。而EA+W组(13.42±1.96)d与EA组比较,创面愈合时间延长。第二部分:HE染色病理学观察压疮模型愈合的过程发现,EA组创面局部炎性细胞减少较其他组快,而成纤维细胞增殖数量较其他组多,肉芽组织出现较其他组早,血管新生早于其他实验组。免疫组化结果:B组皮肤组织中eNOS蛋白表达量较少,连续观察9d,均衡稳定表达无明显变化。M组呈缓慢上升表达,5d组表达最强,7d、9d组较前表达量降低。与B组比较,M组表达量显著高于B组(P<0.01);EA组eNOS蛋白表达量进行性上升,3d组达峰值后,仍持续高表达,7d、9d组表达数量逐渐减少。与M组比较,EA组eNOS蛋白各时间点均高于M组(P<0.05);EA+W组eNOS蛋白缓慢上升表达,其表达峰值出现在5d组,各时间点表达量均显著低于EA组(P<0.01)。W组eNOS蛋白各时间点表达量明显低于M组(P<0.05)。B组p-bads136蛋白各时间点无明显变化。M组p-bads136蛋白呈上升表达,7d组开始持续降低。与B组比较显著高于B组(P<0.01)。EA组p-bads136蛋白表达量进行性上升,3d组达峰值后,仍持续高表达。7d、9d组下调表达。与M组比较,各时间点均高于M组(P<0.05)。EA+W组p-bads136蛋白缓慢上升表达,5d组蛋白表达量下调,各时间点均显著低于EA组(P<0.01)。W组有缓慢上升的趋势,但与M组比较W组各时间点p-bads136蛋白均维持低表达,各时间点均低于M 组(P<0.05)。B组p-akts473蛋白少量均衡表达,连续观察无明显变化。M组p-akts473蛋白呈上升表达。于第5d组达峰值后,持续降低。与B组比较各时间点均明显高于B组(P<0.05)。EA组p-akts473蛋白表达量进行性上升,3d组达峰值后,仍持续高表达,7d、9d组下调表达。与M组比较,各时间点均高于M组(P<0.05或P<0.01)。EA+W组p-akts473蛋白3d组达峰值,5d组蛋白表达量开始下调,各时间点均明显低于EA组(P<0.01)。与M组比较W组各时间点p-akts473蛋白表达量均降低,各时间点均低于M组,且有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR结果:B组皮肤组织中eNOSmRNA均衡稳定表达无统计学意义。M组,eNOSmRNA持续上升表达,5d组达峰值后,下行表达。与B组比较,明显高于B组(P<0.05)。EA组进行性上升,3d组达峰值后,仍持续高表达,7d组表达量较前降低。与M组比较,明显高于M组(P<0.05)。EA+W组干预后eNOSmRNA缓慢上升表达的趋势,但与EA组比较上升幅度小,eNOSmRNA表达量均明显低于EA组(P<0.05)。与M组比较,W组各时间点eNOSmRNA表达量均降低(P<0.05)。B组badmRNA均衡表达,持续观察各时间点无明显变化。M组badmRNAld、3d组持续高表达,之后有所下降,与B组比较M组badmRNA明显高表达(P<0.01);EA组badmRNA持续低表达,与M组比较EA组badmRNA呈低表达,各时间点表达量均显著低于M组,(P<0.01):EA+W组badmRNA各时间点均呈高表达,各时间点较EA组明显升高(P<0.01);W组与M组比较各时间点badmRNA均呈高表达(P<0.05)。Western Blot结果:B组皮肤组织中(p-eNOSs1177)蛋白均衡表达,连续观察无明显变化无统计学意义。M组p-eNOSs1177呈缓慢上升表达,第9d组起表达量呈下降趋势。与B组比较,M组各时间点表达量明显高于B组(P<0.05);EA组p-eNOSs1177表达量较M组明显增加,且各时间点维持高表达趋势,与M组比较各时间点均高于M组(P<0.05)。EA+W组p-eNOSs1177蛋白缓慢上升表达,5d组起表达量持续下降,各时间点表达量明显低于EA组(P<0.05);W组p-eNOSs1177蛋白各时间点表达量明显低于M组(P<0.05)。B组Akt及P-akts473均衡表达,各时间点p-akts473/akt无明显差异。M组p-akts473/akt相对表达量逐渐增加,于5d组达高峰,后持续走低。与B组比较,p-akts473/akt呈高表达(P<0.05)。EA组p-akts473/akt相对表达量呈进行性上升,3d组达高峰,仍维持较高表达,与M组比较,各时间点均较M组明显提高(P<0.05)。EA+W组p-akts473/akt持续低相对表达量,有过一过性上升,随之即下调表达,与EA组比较各时间点p-akts473/akt相对表达量显著降低(P<0.01)。W组与M组比较p-akts473/akt相对表达量显著降低(P<0.01)。各时间点B组Bad及p-bads136蛋白维持动态平衡,各时间点p-bads136/bad相对表达量恒定,无统计学意义。M组Bad蛋白高表达,而p-bads136蛋白表达量较少,p-bads136/bad相对表达量较B组明显低,(P<0.05)。EA组p-bads136蛋白持续高表达,p-bads136/bad相对表达量较M组显著升高(P<0.01)。EA+W组p-bads136蛋白少量表达,各时间点p-bads136/bad相对表达量较EA组降低(P<0.001)W组p-bads136蛋白表达量较M组显著降低,各时间点p-badsl36/bad相对表达量明显低于M组(P<0.05)。结论:1.电针傍刺可以促进压疮创面的愈合,有效减短创面愈合所需时间。2.PI3K特异性抑制剂Wortmannin的使用,延长了大鼠压疮创面愈合的时间。说明PI3K/Akt信号通路参与大鼠压疮模型的修复,从压疮形成早期即启动持续至压疮创面的愈合。3.电针傍刺可能通过促进PI3K/AKT信号通路转导激活,促进eNOS活性增强,参与血管再生,进而促进创伤的愈合。4.电针傍刺可能通过激活PI3K/Akt信号通路,激活Akt,p-akt磷酸化促凋亡因子bad,Bad促凋亡作用得到抑制,发挥抗细胞凋亡作用。