黑色素瘤高表达抗凋亡蛋白 Bcl-2，是黑色素瘤对化疗药物产生耐药的原因之一。Apoptin（凋亡素）是来自鸡贫血病毒的小分子蛋白质，能选择性地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无毒副作用，其诱导凋亡的作用不依赖抑癌基因 p53 亦不被抗凋亡蛋白 Bcl-2 所抑制，Bcl-2 增高甚至能够增强其凋亡诱导效应。PTD4-apoptin 融合蛋白是一种具有透膜能力的能特异性诱导肿瘤细胞凋亡的融合蛋白。达卡巴嗪（Dacarbazine，DTIC）是最早由美国 FDA 批准的治疗恶性黑色素瘤的一线药物，至今仍作为评价其他药物对黑色素瘤疗效的标准。本实验旨在探讨 PTD4-apoptin 融合蛋白与化疗药物达卡巴嗪联用对小鼠黑色素瘤细胞 B16-F1，人黑色素瘤细胞系 A875，SK-MEL-5的细胞毒效应以及对荷黑色素瘤小鼠 C57BL/6的抗肿瘤效应，并初步探讨其联用机制。　　 MTT法检测达卡巴嗪联合 PTD4-apoptin 融合蛋白对小鼠黑色素瘤细胞系 B16-F1，人黑色素瘤细胞系 A875，SK-MEL-5的生长抑制作用，CDI分析药物相互作用的特点。DAPI染色观测药物孵育 B16-F1 细胞后细胞核形态的变化，AnnexinV-FITC/PI 双染法检测细胞凋亡率。Western blotting 检测药物孵育 B16-F1 细胞后 Bcl-2和 CDK2的表达变化，初步探索两药联合作用的机制。皮下注射 B16-F1 细胞建立 C57BL/6小鼠荷黑色素瘤模型，观察PTD4-apoptin 融合蛋白及其与化疗药物达卡巴嗪联用对黑色素瘤的生长抑制作用。肿瘤标本制成石蜡切片后分别做原位免疫组化以及 TUNEL染色，观察 PTD4-apoptin 融合蛋白分布情况及肿瘤细胞凋亡情况。对无瘤 C57BL/6小鼠施药后，进行血常规检测，分析药物的骨髓抑制作用。　　 体外实验结果表明，PTD4-apoptin 融合蛋白与达卡巴嗪均可抑制小鼠黑色素瘤细胞系 B16-F1，人黑色素瘤细胞系 A875，SK-MEL-5的增殖并呈剂量依赖关系。三种不同浓度的 PTD4-apoptin 融合蛋白分别与不同浓度的达卡巴嗪联用对三种不同的黑色素瘤细胞的生长抑制作用比达卡巴嗪单药明显增强，CDI分析两药相互作用的性质，CDI＜1，表明两者联合有协同效应；在某些浓度联合时CDI＜0.7，具有显著的协同效应。DAPI染色和 AnnexinV-FITC/PI 双染法检测两药联合孵育B16-F1细胞的细胞凋亡事件，结果表明，联合用药后，细胞凋亡程度加强，细胞凋亡率显著升高。Western blotting检测到联合用药后 B16-F1 细胞中 CDK2和 Bcl-2的表达均有所升高。　　 采用C57BL/6荷瘤小鼠模型进行药物的体内实验，结果表明，PTD4-apoptin 融合蛋白能有效抑制小鼠黑色素瘤生长，而 PTD4-EGFP 融合蛋白与 PBS 不能。PTD4-apoptin 融合蛋白与达卡巴嗪以不同比率联合治疗小鼠黑色素瘤，结果表明“半剂量”联合治疗组或“全剂量”联合治疗组对黑色素瘤的抑制效应显著高于 PTD4-apoptin 融合蛋白单药治疗组或达卡巴嗪单药治疗组，且“半剂量”或“全剂量”联合治疗组其抑瘤效应无明显差异。TUNEL染色以及原位免疫组化结果显示，PTD4-apoptin 融合蛋白单用能够有效透过皮肤进入肿瘤组织，两者联合能引起大量的肿瘤组织细胞凋亡。血常规检测，分析药物的骨髓抑制作用，结果显示，与对照组相比，达卡巴嗪单药治疗组有骨髓抑制作用，PTD4-apoptin 融合蛋白及“半剂量”联合治疗组没有骨髓抑制作用，而“全剂量”联合治疗组骨髓抑制作用也明显小于达卡巴嗪单药组。　　 PTD4-apoptin 融合蛋白能够有效抑制黑色素瘤的生长，与达卡巴嗪联用后对黑色素瘤的生长有协同抑制效应。PTD4-apoptin 融合蛋白能够加强达卡巴嗪的抑瘤效应且无骨髓抑制作用。PTD4-apoptin 融合蛋白和达卡巴嗪的协同效应可能与 CDK2和Bcl-2 有关。本研究为临床针对黑色素瘤个体特性进行治疗提供了一个新的思路。