目的:青光眼是目前致盲的主要眼病之一，其对视神经和视功能损害呈进展性和不可逆性。深层巩膜切除术(deep sclerectomy，DS)是一种非穿通性滤过手术。Kozlov(1989)首先提出这一新的抗青光眼手术方法，主要目的是减少传统小梁切除术后的早期并发症，为开角型青光眼的治疗开辟了新途径，但术后由于瘢痕化而使手术效果无法维持长久。为了维持减压房的存在，国内外学者于术中切除深层角巩膜组织后放置了不同的植入材料，如胶原植入物、透明质酸钠凝胶、羊膜、SK GEL生物胶等，有些取得了较为满意的效果，有些因价格昂贵受到一定的限制。我院曾将醛化脐带动脉管作为一种新的房水引流物应用于难治性青光眼手术中，将醛化脐带静脉管作为一种新的房水引流物应用于DS手术中，经动物实验及临床应用，结果较为满意。但因保存方法、抗原性不确定等原因很难在临床广泛使用。因此我们将去内皮、冻干辐照人脐静脉管植入兔巩膜下减压室，观察组织形态学变化、眼压、滤过泡以及并发症等，评价此种植入物的应用价值。　　 本实验通过建立兔眼深层巩膜小梁切除术的模型，分别运用免疫组织化学和半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法，观察术后不同时间点手术区组织中TGF-β1，及CTGFmRNA和蛋白表达水平，进一步了解TGF-β1，及CTGF在青光眼滤过术后瘢痕形成过程中的作用，并观察去内皮、冻干辐照人脐带静脉管植入后对手术区瘢痕形成的影响，探讨其安全性和组织相容性，观察其在深层巩膜切除术后维持减压房存在的作用。　　 方法:　　 1、去内皮、冻干辐照HUV的制备取新鲜脐静脉，0.25％胰蛋白酶水浴去内皮细胞。然后将去内皮的脐静脉置入-80℃速冻24h，-70℃5μHg冷冻干燥6h。双层密封袋真空包装。60Co200cGy辐照30s。室温保存。　　 2、光镜下观察脐带静脉管组织结构，电镜下观察脐带静脉管组织结构，进行免疫水平测试。　　 3、植入兔眼后，术后每日观察切口愈合情况、滤过情况、结膜充血情况及前房炎症反应.　　 4、手术后3d，7d，14d各处死8只兔子。不同组的动物处死后立即摘除双眼球，10％福尔马林固定，常规脱水、透明、石蜡包埋、切片，HE染色，在并在光镜下手术区形态学的观察。　　 5、建立兔眼深层巩膜切除术的模型，植入去内皮、冻干辐照HUV，分别运用免疫组织化学和半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法，观察术后不同时间点手术区组织中TGF-β1及CTGFmRNA和蛋白表达水平.　　 结果:　　 1、光镜下脐带静脉管组织结构的观察正常组脐带静脉壁内弹力膜比较完整，在血管横切面上，由于血管壁收缩，内弹力膜呈叠扇状，处理组内壁上无血管内皮细胞，中膜平滑肌细胞未见明显改变，弹性纤维量少，散在分布，胶原纤维则交织成网状，密集分布；外膜疏松结缔组织、成纤维细胞及少量平滑肌细胞结构正常。　　 2、电镜下脐带静脉管组织结构的观察正常组：血管内皮细胞呈长梭形或椭圆形，顺血管长轴呈螺旋状排列，未见内膜下结构。实验组脐静脉内皮细胞已完全去除，显示面为内皮下层以及纤细的胶原纤维和弹力纤维。　　 3、HLA-DR抗原检测：　　 对照组血管免疫组化细胞染色显示血管结构清晰，棕黄色主要表达在内弹力膜及其血管内皮细胞，整体组织均呈淡黄色。而经处理组阳性表达量明显减少。处理组的HLA抗原水平下降明显，与对照组相比差异有显著性(P<0.01)。　　 4、眼压测定　　 术前24只兔子48只眼平均眼压为(20.26±2.948)mmHg，造模前所有兔子眼压经统计学处理差异均无显著性(P>0.05)。实验组术后各时间点眼压低于术前(P<0.05)；对照组术后各时间点眼压低于术前(P<0.05)；术后3天、7天，对照组与实验组眼压相比无明显差异(P>0.05)，术后10天、14天，对照组与实验组眼压相比有明显差异(P<0.05)，表明在术后一周左右，是否植入HUV，对DS眼压无明显影响；一周以后，出现差异，具有统计学意义(P<0.05))。　　 5、术后滤过泡及炎症反应观察7天内两组术区均可见轻度结膜充血，2眼(实验组1眼、对照组2眼，术中均曾发生微穿透)术后7天内自行恢复；术后高眼压2眼(出现于对照组，术中发生玻璃体脱出，9-0丝线紧密缝合)。其余实验组和对照组在观察期内无明显炎症反应，未见伤口不愈合或前房变浅、消失发生；所有实验组眼中植人的脐带静脉管均未见裸露及被排出现象。术后第3天实验组和对照组所有眼均形成明显弥散的滤过泡；术后7天，实验组和对照组滤过泡存留情况基本相似，差异无统计学意义；术后1-2周实验组滤过泡存留比率大于对照组，差异显著(P<0.05)。　　 6、光镜观察　　 深层巩膜切除术联合去内皮冻干辐照脐带静脉管植入组术后第3天可见HUV管腔存在，与巩膜之间可见少量成纤维细胞；术后第7天见HUV管腔存在，与巩膜之间见明显成纤维细胞，滤过区有炎症细胞和成纤维细胞形成，术后第14天可见HUV管腔存在，而滤过区有较多炎症细胞浸润，成纤维细胞较7天减少，可见瘢痕形成。而对照组手术后第3天即开始有少量成纤维细胞形成，第7天手术区成纤维细胞形成增多，到第14天时手术区滤过道区域可见大量红细胞及少量炎症细胞，且成纤维细胞数量减少，增生组织排列杂乱无章，滤过道区域可见纤维组织形成。　　 7、TGF-β1表达的观察TGF-β1在正常巩膜中有低浓度的表达，植入组术后3d，表达明显上升，到7d时达到高峰，随后有所下降，但仍明显高于正常组的表达水平，差异有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1mRVA组间T检验表明各实验组与正常组的差异有统计学意义；未植入组术后3d，表达明显上升，到7d时达到高峰，随后有所下降，但仍明显高于正常组的表达水平，差异有统计学意义(P<0.05)。　　 8、两种手术术区组织TGF-β1 mRNA RT-PCR的比较结果手术后3天、7天、14天，两种不同手术手术区组织TGF-β1 mRNA RT-PCR产物的生成基本一致，差异无显著性(P>0.05).　　 9、CTGF表达的观察CTGFmRVA组间T检验表明各实验组与正常组的差异有统计学意义，CTGF在正常巩膜中有低浓度的表达，植入组术后3d，表达明显上升，到7d时达到高峰，随后有所下降，但仍明显高于正常组的表达水平，差异有统计学意义(P<0.05)。CTGF在未植入组术后3d，表达明显上升，到7d时达到高峰，随后有所下降，但仍明显高于正常组的表达水平，差异有统计学意义(P<0.05)。　　 10、两种手术术区组织CTGF mRNA RT-PCR的比较结果手术后3天、7天、14天，两种不同手术手术区组织CTGF mRNA RT-PCR产物的生成基本一致。　　 11、TGF-β1和CTGF蛋白表达在两组3d、7d、14d巩膜手术区组织，可见巩膜纤维细胞TGF-β1和CTGF蛋白阳性染色，其中7天组阳性染色细胞数较多，表明TGF-β1在7天时表达最明显，随后降低。实验组与正常组比较有统计学意义。(P<0.05)。两组之间各时间点比较无明显统计学意义。(P>0.05).　　 结论:　　 1、经去内皮、冻干辐照处理的HUV，内皮细胞消失，抗原性明显降低，但中膜平滑肌细胞未见明显改变，胶原纤维及外膜疏松结缔组织、成纤维细胞及少量平滑肌细胞结构正常，并且能够在真空密封袋中室温保存，是一种取材方便、价格合理、使用安全方便的DS植入物。　　 2、去内皮冻干辐照脐带静脉管作为DS的植人材料取材方便，抗原性低，有良好的组织相容性，眼局部反应轻，无毒副作用，对正常家兔眼有明显的降压作用。　　 3、经去内皮、冻干辐照处理的HUV植入深层巩膜切除术后的兔眼，可以起到良好的降眼压的效果，并且管腔始终开放，起到滤过作用。　　 4、HUV在兔眼DS中起到的降压作用，可能是通过自然管腔的机械引流作用完成的。并未发现有明显的抗纤维增生的作用。