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研究背景我国是食管癌较为高发的国家,它的发病率和死亡率一直居高不下,因为食管癌的预后较差、五年生存率低。尤其是位于河南省的林州地区,其食管癌发病率位于全国之首。食管癌的发生有多种相关因素,包括遗传,生活环境,化学因素,生物因素,个人习惯等。食管鳞状细胞癌在食管癌中,属于发病率较高的食管肿瘤。而食管鳞癌的转移和浸润机制,是研究食管鳞癌的发展进程中的至关重要的环节,了解参与食管鳞癌浸润和转移的关键因素,是研究食管鳞癌,并对其进行有效治疗的关键。趋化因子和其相关受体在很多恶性肿瘤的发生发展、浸润和转移中起着重要的作用,趋化因子是一类小分子蛋白质家族中的一员,它与细胞的结构重塑有关,并且介导体内多种细胞的迁移,并与G蛋白耦联受体相互作用而参与多种生理病理过程。CXC类趋化因子属于趋化因子超家族,在人类很多肿瘤的发生、发展、血管生成和浸润转移中有着重要的作用。趋化因子受体(Chemokine receptor)CXCR-2在人体组织中的分布非常广泛,目前已知有几十种人类恶性肿瘤存在CXCR-2表达。CXCR-2在肿瘤细胞的生长、迁移中起着至关重要的作用,对肿瘤的发生和发展具有重要的影响,其表达与恶性转移明显相关。作为最重要的趋化因子受体家族之一,CXCR-2在食管鳞癌组织中的表达对评估临床预后的意义目前很少研究。近几年的研究发现,上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是许多恶性肿瘤侵袭、转移的机制之一。有研究发现,CXCR-2可通过EMT促进乳腺癌的侵袭转移。但是截止目前,CXCR-2是否参与食管鳞癌的侵袭转移及可能的机制尚不清楚。本研究首先通过免疫组织化学方法检测CXCR-2在食管鳞癌组织与癌旁正常食管黏膜组织中的表达情况。然后在食管鳞癌细胞系KYSE-450和EC-1细胞中添加不同浓度IL-8,并在不同时间检测其受体CXCR-2和EMT标志蛋白上皮钙粘蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin)和Snail的蛋白表达及mRNA的表达,检测IL-8刺激对细胞进行迁移和侵袭的影响。研究方法1.采用免疫组织化学S-P法对190例食管鳞癌和154例正常食管黏膜中CXCR-2表达的情况进行检测,分析食管鳞癌中CXCR-2的表达情况与患者的年龄、性别、部位、肿瘤分化程度、淋巴结转移、浸润深度及肿瘤pTNM分期等临床病理参数之间的关系,及对患者预后的影响。2.不同浓度CXCR-2的配体IL-8(0,0.05ug/ml,0.1ug/ml)处理食管鳞癌细胞(EC-1和KYSE-450),不同时间(0h,24h,48h)后,采用Western blotting和Real-time PCR方法检测CXCR-2,Vimentin,Snail和E-cadherin的蛋白及mRNA的表达变化。3.用CXCR-2的配体IL-8(0.1ug/ml)处理食管鳞癌细胞(EC-1和KYSE-450)48h后,采用侵袭小室实验及迁移实验检测细胞侵袭迁移能力的变化。结果1.CXCR-2在正常食管黏膜中的阳性率为16%(25/190),在食管鳞癌中的阳性率为58%(110/190),明显高于正常的食管黏膜阳性率,而且两者的差异有统计学意义(P<0.05)。食管鳞癌中CXCR-2的表达与年龄、性别、肿块部位、浸润深度、肿瘤分化程度无关(P>0.05),而与淋巴结转移、p TNM分期呈正相关(P<0.05),即CXCR-2阳性表达的患者更易伴有淋巴结转移,且分期较高。食管鳞癌中CXCR-2阳性表达的患者较阴性表达者生存率低,且具有有统计学意义(P<0.05)。2.不同浓度IL-8(0,0.05ug/ml,0.1ug/ml)处理食管鳞癌细胞(EC-1,KYSE-450)不同时间(0h,24h,48h)后,观察CXCR-2、Vimentin、E-cadherin和Snail蛋白及mRNA表达水平的变化。结果显示:在EC-1和KYSE-450细胞中,与未加入IL-8的对照组细胞相比,在相同浓度下随着时间的增加,CXCR-2、Vimentin和Snail蛋白及mRNA表达水平总体呈上升趋势,差异有统计学意义(P<0.05),但E-cadherin的mRNA及蛋白表达呈下降趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.Transwell体外迁移实验的结果显示:与空白组(97.333±15.011和139.333±12.055)相比,加入IL-8的KYSE-450和EC-1细胞穿膜数(145.333±7.023和305.000±17.691)明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。Transwell体外侵袭实验的结果显示:与空白组(83.333±10.263和120.000±13.114)相比,加入IL-8的KYSE-450和EC-1细胞穿膜数(123.000±7.549和210.000±15.874)明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.CXCR-2的高表达可促进食管鳞癌的浸润转移,且可能与病人差的预后有关。2.炎症介质IL-8可上调食管鳞癌中CXCR-2的表达。3.CXCR-2促进食管鳞癌浸润转移可能涉及EMT途径。