【摘 要】
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Beta-内酰胺酶是引起大多数致病菌对beta-内酰胺类抗生素耐药的重要原因。金属beta-内酰胺酶(MBLs)由于水解底物谱广,临床上使用的beta-内酰胺酶抑制剂如克拉维酸、舒巴坦和
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Beta-内酰胺酶是引起大多数致病菌对beta-内酰胺类抗生素耐药的重要原因。金属beta-内酰胺酶(MBLs)由于水解底物谱广,临床上使用的beta-内酰胺酶抑制剂如克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦均无法抑制且能水解碳青霉烯类抗生素而倍受关注。为了研究金属beta-内酰胺酶的酶学特性,本文首先在大肠杆菌中表达并纯化了金属beta-内酰胺酶ImiS,确定了其最佳培养条件。经SDS-PAGE及MALDI-TOF MS鉴定,所得金属beta-内酰胺酶ImiS分子量为25209.91 Da (25kDa),通过其紫外可见光谱及荧光光谱进行表征,发现金属beta-内酰胺酶ImiS在330 nm处荧光发光明显。为了深入了解金属beta-内酰胺酶的酶学特性,本文测定了金属beta-内酰胺ImiS催化三类六种beta-内酰胺类抗生素水解的动力学常数,并研究了Marinopyrrole A作为抑制剂时ImiS催化法罗培南水解的抑制动力学过程,确定了Marinopyrrole A为非竞争性抑制剂,抑制常数Ki=24.9μM。同时,研究了pH,温度及底物浓度对ImiS活性的影响,发现ImiS酶活的最佳条件为(44.8±0.8)℃,pH=7.5±0.1。为进一步探索beta-内酰胺类抗生素与金属beta-内酰胺酶的作用及其作用机理,本文成功地构建了一个新型的金属beta-内酰胺酶的光敏底物,对其进行了光谱表征。通过一系列化学及生物学的手段对其进行了深入研究,测定了其生物活性及反应活性,结果表明,该化合物是一个潜在的金属beta-内酰胺酶的检测试剂,并且具有高效,低毒,快速,低检测限等特点。
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