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目的:研究MA-5(mitochonic acid-5)对TNF-α诱导炎性损伤小胶质细胞的保护作用及机制。方法:首先将BV-2细胞分为对照组、TNF-α组以及TNF-α与MA-5共孵育组,通过MTT法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,半胱天冬酶3活性检测来研究MA-5是否抑制TNFα诱导的BV-2细胞凋亡。通过JC1染色检测线粒体膜电位、检测mPTP开放率、线粒体钙检测以及Western blots检测凋亡蛋白半胱天冬酶-3(Caspase-3)、半胱天冬酶-9(Caspase-9)表达来确定TNF-α诱导的BV-2细胞凋亡是否经线粒体凋亡途径进行。应用siRNA敲低Bnip3的表达,检测线粒体和溶酶体荧光共定位以及Caspase-9活性以确定MA-5是否激活Bnip3相关的线粒体自噬。应用流式细胞术分析细胞内ROS含量并检测细胞内抗氧化因子GSH、SOD、GPx以及细胞内ATP从而确定MA-5能否降低氧化应激并维持能量代谢。结果:1.MA-5以剂量依赖式方式降低TNF-α损伤小胶质细胞BV-2的细胞凋亡BV-2细胞经TNF-α处理后,细胞活力显著降低,而Caspase-3的活性及TUNEL阳性细胞的数量增加,应用MA-5干预后,BV-2细胞活力显著增加,Caspase-3的活性及TUNEL阳性细胞的数量减少,并且呈剂量依赖性,表明MA-5可逆转TNF-α损伤小胶质细胞BV-2的细胞凋亡。2.TNF-α诱导BV-2细胞凋亡依赖于Caspase9介导的线粒体凋亡途径TNF-α处理后,BV-2细胞线粒体膜电位降低、钙超载、mPTP开放及促凋亡因子Caspase-9、Caspase-3活性增加,经MA-5干预后,BV-2细胞的线粒体膜电位、钙离子含量、mPTP开放率以及Caspase-9、Caspase-3活性均恢复至正常水平,表明TNF-α诱导BV-2细胞凋亡依赖于Caspase-9介导的线粒体凋亡途径。3.MA-5激活Bnip3相关的线粒体自噬以维持线粒体稳态TNF-α处理后,BV-2细胞内Bnip3的表达、线粒体自噬数量以及Caspase-9的活性均降低,表明线粒体自噬被TNF-α诱导的炎症反应所抑制;MA-5干预后,BV-2细胞Bnip3的表达、线粒体自噬数量以及Caspase-9的活性恢复至正常水平,表明MA-5可以逆转受抑制的线粒体自噬活性,从而抑制线粒损伤。siRNA敲低Bnip3的表达后,MA-5对线粒体自噬的促进作用消失,表明MA-5激活线粒体自噬依赖于Bnip3表达。4.MA-5激活的线粒体自噬可以降低细胞的氧化应激并有利于能量代谢TNF-α处理后,BV-2细胞内ROS的水平增加,MA-5可以减少细胞内ROS水平。当应用siRNA敲低Bnip3表达后,MA-5不能减少经TNF-α处理BV-2细胞内ROS水平;TNF-α处理后,BV-2细胞内GSH、SOD和GPx及ATP的表达水平减少,MA-5可增加上述抗氧化因子及ATP的表达,但MA-5的逆转效果在Bnip3被沉默后消失。表明MA-5通过激活Bnip3相关的线粒体自噬降低BV-2细胞中过度的氧化应激反应并有利于能量代谢。结论:MA-5拮抗TNF-α损伤小胶质细胞BV-2的凋亡,其机制是通过激活Bnip3依赖的线粒体自噬。