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本研究以2003年从广东省惠东县分离到的四株S.iniae(HD-1,HD-2,HD-3,HD-4)为材料,初步研究了S.iniae的致病性,筛选出一株免疫效果较好的菌株作为疫苗株,并对该疫苗株与四种不同佐剂制备的全细胞灭活疫苗的免疫效果进行比较和评价。
关于S.iniae致病性方面,我们选取HD-1株为代表,利用Reed-Muench法计算腹腔注射条件下HD-1株的半数致死量(LD50)为5.3×106cfu/尾。对人工感染条件下罗非鱼的发病情况进行监测,结果发现腹腔注射感染的罗非鱼同自然条件下发病鱼的临床症状一致,病鱼表现出体色发黑,体表出血,游动姿势异常等一系列鱼类链球菌病的典型症状。对病鱼进行剖检,结果发现病鱼的脑、肾脏出血;肝脏、脾脏肿大,褪色;胃肠有积水;胆囊肿大,结合病理组织切片的结果,可以确定S.iniae是我国养殖鱼类链球菌病的首要病原。
将四株S.iniae(HD-1,HD-2,HD-3,HD-4)的培养液灭活后,同佛氏佐剂混合,制备四种佛氏全细胞灭活疫苗,然后通过腹腔注射免疫罗非鱼,经过两次免疫,初次免疫后35天,分别用对应的菌株攻毒,统计14天内各组鱼的死亡情况,计算各免疫组的保护率(RPS),并监测血清抗体效价的变化。结果表明使用HD-1株制备的佛氏全细胞灭活疫苗保护率达到91.2%,最高血清抗体凝集效价达到1:16,免疫效果较好,可作为疫苗株的候选。
将选取的疫苗株(HD-1)培养液经灭活处理后,同四种不同的佐剂(佛氏佐剂,铝胶佐剂,蜂胶佐剂,白油佐剂)混合,制成四种全细胞灭活疫苗。通过腹腔注射接种罗非鱼,初次免疫后21天,用HD-1株攻毒,统计14天内各组鱼的死亡情况,计算各免疫组的保护率,并监测血清抗体效价的变化。结果表明用佛氏佐剂和白油制备的全细胞灭活疫苗具有较好的免疫保护效果,可作为商品化S.iniae疫苗的候选。