第一部分 SIP及SCPB蛋白不同途径及不同佐剂粘膜免疫的研究 目的：B族链球菌(Group B streptococci，GBS)是引起新生儿侵袭性感染的常见病原菌之一，应用疫苗预防是一种简单而有效的方法，有效的粘膜抗体对预防新生儿感染有着重要的意义。本研究即选择表面免疫原性蛋白(Surface immunogenic protein，Sip)和C5a肽酶(streptococcal C5a peptidase，ScpB)二个蛋白为研究对象，对其进行纯化鉴定、并探讨其不同途径、不同剂量、不同佐剂粘膜免疫后的免疫效果。 方法：在大肠杆菌BL21中表达Sip及ScpB蛋白，亲和层析法进行纯化，质谱分析法对所纯化的蛋白进行鉴定。 动物分组：1、Sip及ScpB蛋白不同途径及不同剂量免疫：小鼠随机分为6组，每组10只。分别为对照，鼻内5μg、鼻内15μg、鼻内45μg组，直肠50μg组、直肠100μg组。2、Sip及ScpB蛋白不同佐剂粘膜免疫：小鼠随机分为4组，每组10只，分别为对照组PBS，实验组5μg Sip+5μg ScpB，5μg Sip+5μg ScpB+9μg CpG—ODN，5μg Sip+5μg ScpB+1.5μg CT。 用ELISA法检测小鼠血清及粘膜萃取液中特异性抗体水平；调理吞噬试验检测Sip及ScpB蛋白抗血清的保护性功能。 结果：1、成功表达并纯化了Gp—Sip和pET—Sip蛋白，质谱分析和蛋白质库的比较证实其为B族链球菌表面免疫相关蛋白(Sip)的可能性分值分别为177和92。ELISA显示：Sip蛋白鼻内及直肠两种途径粘膜免疫后均可诱发小鼠产生高水平的血清IgG及粘膜IgA抗体(p<0.01)，鼻内免疫效果好于直肠(p<0.05)；不同剂量的Sip蛋白鼻内及直肠免疫后，免疫效果组间比较无统计学意义(p>0.05)；Sip蛋白抗血清具有明显地促进吞噬细胞对GBS的吞噬作用。 2、成功表达并纯化了ScpB蛋白；质谱分析和蛋白质库比较证实其为B族链球菌表面蛋白C5a肽酶的可能性分值为175；ELISA显示ScpB蛋白鼻内及直肠途径免疫后在小鼠血清中均产生高水平特异性IgG及IgA抗体(p<0.01)，鼻内免疫组间比较，45μg剂量组IgG大于5 ug及15μg剂量组(p<0.05)；直肠免疫组间比较，100μg剂量组大于50μg剂量组(p<0.05)；鼻内途径免疫后可在小鼠肺、阴道、直肠粘膜中产生高水平的粘膜特异性IgA抗体，与对照组相比有显著性意义(p<0.01)；直肠免疫后仅可在小鼠阴道、直肠粘膜中产生高水平的粘膜特异性IgA抗体，与对照组相比有显著性意义(p<0.01)。ScpB抗血清对细菌具有调理吞噬作用，吞噬指数为12.3，与对照组相比具有明显差异(p<0.05)。 3、两种蛋白不同佐剂粘膜免疫后的血清及阴道粘膜特异性抗体水平均较对照组明显升高，但不同佐剂组间差异无统计学意义。结论CT与CpG两种粘膜佐剂产生的免疫效果相当，CpG具有安全、经济、能增强许多抗原的免疫作用，可用于GBS实验性疫苗粘膜免疫佐剂的研究。 结论：Sip和ScpB均具有较好的粘膜免疫原性，鼻内途径免疫时小剂量即可产生好的免疫效果，直肠免疫时需要的剂量较大；CT与CpG两种粘膜佐剂产生的免疫效果相当，CpG—ODN具有安全、经济、能增强许多抗原的免疫原性的作用，可用于GBS实验性疫苗粘膜免疫佐剂的研究。 第二部分 新生儿B族链球菌表面蛋白Sip及ScpB特异性抗体水平的检测 目的：测定新生儿体内B族链球菌表面免疫原性蛋白(Surface immunogenic protein，Sip)及C5a肽酶(streptococcal C5a peptidase，ScpB)特异性IgG抗体的水平，初步对国内新生儿GBS的抗体水平进行了研究，并了解Sip及ScpB蛋白作为GBS疫苗候选成分的可行性。 方法：随机选取110例新生儿，取其静脉血，采用为酶联免疫吸附试验(ELISA)测定GBS表面蛋白Sip及ScpB特异性抗体含量，并对检测结果进行统计学分析。结果新生儿GBS表面蛋白Sip及ScpB特异性IgG抗体水平较高，Sip蛋白抗体几何平均滴度为：1：7080，ScpB蛋白抗体几何平均滴度为：1：4898；患细菌感染性疾病(肺炎、脑膜炎、败血症)的新生儿与非细菌感染性疾病的新生儿抗体水平无显著性差异，P>0.05；不同年龄阶段新生儿抗体水平无差异，P>0.05；Sip蛋白早产儿的抗体水平低于正常产儿，P<0.05。 结论：新生儿体内GBS表面蛋白Sip及ScpB的抗体水平普遍较高，这可能是我国新生儿感染发生率低的原因之一，并提示Sip及ScpB蛋白特异性抗体可通过胎盘传递给胎儿，Sip及ScpB蛋白可以作为GBS疫苗的候选成分。