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研究背景:肝纤维化是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生,导致肝内弥漫性细胞外基质过度沉积的病理过程。许多慢性肝脏疾病最终均发展为肝纤维化及肝硬化。在肝纤维化进程中,肝星状细胞的活化是关键事件。胶原纤维等细胞外基质多是由肝星状细胞活化而成的肌成纤维细胞产生的。一般认为肝星状细胞有四种状态:原始静止的肝星状细胞、激活的肝星状细胞、静止的肌成纤维细胞、衰老凋亡的肝星状细胞。有学者提出抗肝纤维化的主要策略包括诱导肌成纤维细胞凋亡、维持细胞静止表型或抑制细胞活化等。但迄今为止,临床上尚无确切有效的抑制肝星状细胞的抗纤维化药物,肝纤维化仍缺乏有效治疗手段。间充质干细胞(Mesenchymal stem cell,MSC)是来源于中胚层的一类成体多能干细胞,除具有自我增殖和多向分化等干细胞特性外还具有免疫调节、靶向归巢、靶向抗炎、主动适应并改造微环境等生物学特性,使MSC适用于多种组织修复治疗。研究表明MSC对缺血性心肌梗死引起的心脏纤维化、自身免疫性疾病引起的肾脏纤维化及特发性肺间质纤维化均有疗效。最近,Kharaziha P等利用MSC治疗肝硬化I-II期临床研究和Salama H等利用MSC治疗终末期丙肝肝病研究中发现MSC在抗肝纤维化方面有一定疗效,提示MSC移植在治疗肝纤维化方面具有广阔的应用前景。但由于多个临床中心的研究结果并不一致,治疗机制尚未明确,均有待于进一步的基础与临床研究。研究目的:研究MSC移植对肝纤维化和HSC活化的影响及其可能机制。研究方法:Ficoll-Hypaque梯度密度离心法及细胞贴壁培养法分离纯化骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cell,BM-MSC)。取18只SD大鼠,通过腹腔小剂量注射CCl4 8周,进行肝纤维化造模,在造模4周时,取其中9只作为治疗组,每周经尾静脉移植给予该组每只大鼠6×106个MSC,持续4周;另外9只作为模型对照组,经尾静脉移植给予不含MSC的等量生理盐水,持续4周;另取9只大鼠,作为正常对照组,仅给予尾静脉等量生理盐水注射,持续4周。自实验开始,每周用全自动生化分析仪测定血清ALT、AST、TBIL、ALB水平,至结束共测定8次。实验终点8周时通过免疫组化方法对α平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)和Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ,COLⅠ)在肝组织中的定位和表达进行研究;原位灌注和梯度密度离心法分离HSC,326nm紫外光激发和α-SMA免疫荧光染色法鉴定HSC;q RT-PCR和Western Blot检测HSC中α-SMA、TGF-β1、COLⅠ、解偶联蛋白2(Uncoupling protein 2,UCP2)、解偶联蛋白3(Uncoupling protein 3,UCP3)基因和蛋白的表达水平。研究结果:1、与模型组相比,治疗组经MSC移植治疗后,血清ALT、AST、TBIL水平逐渐呈下降趋势,经统计学分析有显著差异;2、治疗组肝组织纤维化和炎症细胞浸润程度较模型组明显改善、肝组织α-SMA、TGF-β1和COLⅠ表达水平较模型组明显减低,经统计学分析有显著差异;3、与模型组相比,治疗组HSC中α-SMA、TGF-β1、COLⅠ基因和蛋白表达水平下降,UCP2、UCP3基因和蛋白的表达水平升高,经统计学分析有显著差异。结论:1、CCl4长期小剂量腹腔注射能诱导典型的肝纤维化模型,造模过程中以BM-MSC尾静脉注射进行干预治疗,可以减轻肝脏炎症,抑制肝纤维化形成,促进肝功能恢复;2、BM-MSC抗肝纤维化的疗效可能与MSC的抗炎作用及抑制HSC活化相关;BM-MSC可通过上调HSC中UCP2表达而抑制其活化;3、BM-MSC移植可用于治疗肝纤维化。