前言 骨肉瘤是原发于骨组织的恶性肿瘤，居恶性骨肿瘤的第一位。恶性程度高，易发生早期肺转移，预后较差。骨巨细胞瘤比较常见，在我国发病率仅次于骨软骨瘤，属潜在恶性或介于良恶性之间的溶骨性肿瘤，通常刮除后复发率高。目前这两种肿瘤在其判断恶性程度和估计预后方面尚缺乏有效的辅助指标。 p19(ARF)基因是新近发现的肿瘤抑制基因，是INK4(细胞周期依赖性激酶抑制剂)家族成员之一。它的基因位点与p16(INK4A)的基因位点相重叠，统称为INK4A(ARF)位点。p19蛋白普遍存在于出生后的组织中，p19基因的过表达可以导致细胞周期在G1期和G2期的停滞，从而阻断细胞的过度增殖，起到抑制肿瘤生长的作用。它的作用机制是以稳定野生型p53状态来决定的，p19在核仁区与Mdm2相结合，阻断其与p53结合并输送到胞浆中降解的作用，从而增强野生型p53的抑癌作用。p19(ARF)在肿瘤生长中的作用和地位，目前还处于初步研究阶段，本实验旨在探讨其在骨肿瘤中的表达情况，对其做进一步的研究。 实验材料 标本均来自中国医科大学附属第一医院病理科1992年至2001年石蜡切片。其中骨肉瘤25例，骨巨细胞瘤34例，骨软骨瘤23例作为对照组。骨巨细胞瘤按Jaffe病理分级进行分组：Ⅰ级15例，Ⅱ级15例，Ⅲ级4例。所有标本均经常规HE染色，由三位病理老师重新确定。本实验所用试剂中，p19单克隆抗体购于武汉Boster公司，S－P＊％山羊血清和生物素标记的H抗购于福建麦新公司。 实验方法 本实验应用敏感而特异的免疫组化S－P法，对25例骨肉瘤。34例骨巨细胞瘤中的P19蛋白进行检测，与23例骨软骨瘤进行对照，分析p19蛋白在不同骨肿瘤中的表达情况，探讨其在骨肉瘤、骨巨细胞瘤发生、发展中的作用。 实验结果 pig蛋白在25例骨肉瘤细胞中，只有二例呈阳性染色，阳性率为4．00％。在15例1级骨巨细胞瘤中，阳性率为26．67％，在15例11级骨巨细胞瘤中，阳性率为13．33％，4例皿级骨巨细胞瘤中无阳性染色，总阳性率为17．65％。在23例骨软骨瘤中，11例出现阳性染色，阳性率为 47．83％。应用卡方检验进行统计学处理，骨肉瘤组与骨软骨瘤组… 蛋白表达阳性率之比，差异有统计学意义，骨巨细胞瘤组与骨软骨瘤组阳性率比较，差异有统计学意义。骨肉瘤组和骨巨细胞瘤组比较，差异无统计学意义。在骨巨细胞瘤组中，l级与11级阳性率比较，差异无统计学意义，I级与11－皿级阳性率比较，差异无统计学意义。 讨 论 骨肉瘤为常见的原发于骨组织的恶性肿瘤，占恶性骨肿瘤的ZI％。易发生早期肺转移，预后较差。骨巨细胞瘤为源于骨髓内间叶组织的潜在恶性或介于良恶性之间的溶骨性肿瘤，在我国发 ·二·病率仅次于骨软骨瘤。通常刮除后复发率高，可达30％－50％，少数病例可有局部恶变或肺转移。目前这两种肿瘤在其判断恶性程度和估计预后方面尚缺乏有效的辅助指标。 pig（ARF）基因是新近报道的肿瘤抑制基因。它与p16（INK4）＼P15（INK4B）、P18 （INK4）、共同组成了INK4（细胞周期依赖性激酶抑制剂）家族。P19（ARF）的基因位点与…门NK4A）的基因位点相重叠，被称作ARF，编码…（ARF）蛋白。INK4A和ARF基因有它们自己的启动子，产生不同的转录产物。pig蛋白普遍存在于出生后的组织中。p19基因在缺乏 p53基因的细胞中呈现上升的趋势，它的过表达可导致细胞周期在GI期和 GZ期的停滞。国外文现报导，p19基因外显子 lp足以调节细胞周期的停滞。在星形细胞的培养中，缺乏p19｛l6基因或者CDK4增加可使其无衰老性生长。INK4A／ARF基因位点的缺失在恶性周围神经鞘瘤中，特别是进展期中，是一个经常发生的事件。将突变定位在外显子叩，30％的小鼠在 24周内自发地形成了淋巴瘤和淋巴肉瘤。在易患黑色素瘤的家族中发现了整个p16、p19、pls基因簇的缺失。 本实验在国内首次应用免疫组化S－P法研究骨肉瘤、骨巨细胞瘤和骨软骨瘤中P19蛋白的表达。P19蛋白在25例骨肉瘤组中，只有1例呈阳性染色，阳性率为4．00％，在15例1级骨巨细胞瘤中，阳性率为26．67％，在15例11级骨巨细胞瘤中，阳性率为13．33％，4例皿级骨巨细胞瘤中无表达，总阳性率为门．65％。在23例骨软骨瘤中，＊例出现核的阳性染色，阳性率为47 83％。应用卡方检验进行统计学处理，骨肉瘤组与骨软骨瘤组中… 蛋白表达阳性率相比，X’1．05，P＜0．of，差异有统计学意义。该结果反映了P19基因在骨肉瘤的发生发展中可能起到一定的作用。p19蛋白在骨巨细胞瘤组的总表达率明显降低，且与骨软骨瘤相对比，x’＝4．62，P＜0．05，其差异有统计学意义，该结果反映 ·3·了p19基因在骨巨细胞瘤的发生发展中可能也起到一定的作用。骨巨细胞瘤组与骨肉瘤组… 蛋白的表达率相比，x’二1．43，P＞0．05，差异无统计学意义，可能说明