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猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumonia of swine , MPS)是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae , Mhp )引起的猪的一种高发病率,低死亡率的慢性呼吸道传染病,在我国常被称为猪气喘病(或喘气病)。MPS广泛分布于世界各地,猪群中Mhp的感染率在30%～80%,目前大多数养猪国家均报道有此病的发生。病猪长期生长发育不良,生长率和饲料转化率降低,一般死亡率不高,但继发性感染也会造成严重死亡,所致的经济损失很大,对养猪业发展带来严重危害,所以该病是最常发生和经济意义重大的猪病之一。因此,建立可靠实用的MPS快速诊断技术,以便控制和预防该病已成为目前猪病防治的重要研究内容。本试验调查了陕西省宝鸡、杨凌地区自然感染猪支原体肺炎的病例,根据流行病学调查和症状观察表明,MPS不同年龄、性别和品种的猪均能感染,但其中哺乳仔猪及幼龄猪发病率及病死率最高;临床症状可表现为急性、慢性或隐性经过。通过病理剖检和组织学观察表明,MPS病理变化的主要特征是融合性支气管肺炎,于肺脏的不同部位呈“肉样”或“虾肉样”实变;组织学变化以细支气管腔和肺泡腔内细胞浸润为特征;另外肝、脾、肾等器官也发生不同程度的肿大及组织细胞的浸润。参照已发表的猪肺炎支原体P46基因序列,设计合成了1对引物,用此引物进行PCR扩增,得到与预期相符的目的片段。目的片段的序列比较结果表明分离菌株与参考菌株同源性为98.5%。结果表明,此试验中建立的PCR检测方法是成功的。用该方法同时扩增肺炎双球菌、羊链球菌、结核分支杆菌,除猪肺炎支原体扩增出一特异的条带外,其余的均无条带产生,证明了该PCR检测方法具有很强的特异性。对于PCR的敏感性试验显示这对引物能够检测到1ng的DNA,说明具有较强的灵敏度。PCR扩增采集的病料检测结果与临床诊断和病理学诊断结果完全一致。将Mhp的P46基因克隆于pET-32α原核表达载体T7启动子的下游,构建了pET-P46原核表达载体。该载体在其宿主菌BL21(DE3)中诱导表达大小约为47ku的蛋白质,其大小与预计的蛋白大小一致,且随着IPTG诱导时间的变化蛋白含量明显增多,初步表明P46基因获得表达,为进一步建立特异和敏感的ELISA诊断方法奠定了基础。