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目的：肺癌是世界范围内发病率以及病死率最高的恶性肿瘤之一，由于其发病较为隐匿，恶性程度较高，很多患者就诊时肺癌分期已较晚，失去了手术治疗的可能性，而放化疗又不能特异性的杀死癌细胞。因此，寻找新的有效的肺癌诊断治疗靶点，研究其在肺癌发生发展中的作用，对于提高肺癌患者的生存率以及改善预后具有重要的意义[1]。MicroRNAs(miRNAs)是一类广泛存在于真核生物中的长度为22～25nt高度保守非编码的单链小分子RNA，它们能够与靶基因mRNA不完全性地互补结合，在转录后水平调控靶基因的表达，进而参与到胚胎的发育、细胞的分化、增殖、凋亡等过程中[2]。在肿瘤的发生发展中，不同的miRNA分别起着癌基因或者抑癌基因的作用。近年来，大量研究证明miRNAs参与到了肿瘤的侵袭与转移过程中，比如miRNA-128在乳腺癌、前列腺癌、神经系统肿瘤中均有抑癌作用，而miRNA-128对于肺癌的生物学功能影响尚不清楚[3]，因此在本研究中我们系统深入的研究miRNA-128对肺癌细胞株的生物学功能影响，对于探索肺癌的诊断治疗新靶点以及改善肺癌患者预后有着非比寻常的意义。方法：（1）使用real-time PCR技术检测在转移潜能不同的细胞株中miRNA-128表达是否有差异:首先将人肺癌细胞株NL9980/L9981的总RNA提取后，设计miRNA-128的反转录引物以及相应的上、下游引物，以内参U6作为对照，反转录RNA以检测miRNA-128在人肺癌细胞株NL9980/L9981中的表达水平，最后对real-time PCR产物使用琼脂糖凝胶电泳的方法进行鉴定。（2）构建过表达miRNA-128的真核表达载体pCDNA3.1-miR-128：首先查询miRBase数据库确定miRNA-128的基因序列，设计miRNA-128的引物进行扩增，扩增结束后使用琼脂糖凝胶电泳进行鉴定，鉴定成功后构建真核表达载体pCDNA3.1-miR-128，构建完成后使用双酶切以及琼脂糖凝胶电泳再次鉴定，鉴定成功后进行基因测序检测是否为目的基因。（3）建立稳定过表达miRNA-128的细胞株L9981-pCDNA3.1-miR-128：使用前述方法构建成功的真核表达载体pCDNA3.1-miR-128转染L9981细胞株后使用潮霉素首先进行筛选，筛选出可稳定过表达miR-128的细胞株L9981-pCDNA3.1-miR-128，并使用real-time PCR技术来检测目的基因表达水平，以证实细胞株建立是否成功。（4）检测L9981-pCDNA3.1-miR-128细胞株的增殖能力：对稳定过表达miR-128后的L9981细胞株使用MTT法来检测其增殖能力是否改变，并以转染空载体的阴性对照组以及未转染载体的空白对照组作为对比。（5）检测L9981-pCDNA3.1-miR-128细胞株的迁移能力：对稳定过表达miR-128后的L9981细胞株使用划痕试验的方法来检测其迁移能力是否改变，并以转染空载体的阴性对照组以及未转染载体的空白对照组作为对比。（6）检测L9981-pCDNA3.1-miR-128细胞株的侵袭能力：对稳定过表达miR-128后的L9981细胞株使用Boyden小室试验的方法来检测其侵袭能力是否改变，并以转染空载体的阴性对照组以及未转染载体的空白对照组作为对比。结果：（1）通过real-time PCR技术证实了miRNA-128在低转移潜能的人肺癌细胞株NL9980中的表达水平明显高于转移潜能较高的人肺癌细胞株L9981，（2）能够稳定过表达miRNA-128的真核表达载体pCDNA3.1-miR-128经过双酶切、琼脂糖凝胶电泳以及基因测序的方法证实构建成功，进一步使用该载体建立了能够稳定过表达miRNA-128的细胞株L9981-pCDNA3.1-miR-128，并使用real-time PCR技术验证成功；（3）稳定过表达miRNA-128的L9981细胞株经MTT试验证实增殖能力无改变（p﹥0.05）；在划痕试验中，细胞株L9981-pCDNA3.1-miR-128的划痕宽度（195.1±3.819μm）明显大于空白对照组（89.3±2.592μm）以及阴性对照组（121.7±4.623μm）（p<0.01），证实过表达miR-128可降低L9981细胞株的迁移能力；在Boyden小室试验中，L9981-pCDNA3.1-miR-128的细胞透膜数（37.01±2.859）明显小于空白对照组（126.83±4.316）以及阴性对照组（93.25±4.316）（p<0.01），证实过表达miR-128可降低L9981细胞株的侵袭能力。结论：（1）miR-128在高、低转移潜能不同的肺癌细胞株L9981/NL9980中的差异性表达提示其与肺癌转移的相关性，并且其可能发挥抑癌基因的作用。（2）稳定过表达miR-128的真核表达载体pCDNA3.1-miR-128以及稳定过表达miR-128的L9981-pCDNA3.1-miR-128细胞株的建立成功，为研究其在肺癌侵袭和转移中的作用奠定了坚实的基础。（3）过表达miR-128能够降低肺癌细胞株L9981的迁移及侵袭能力，而对增殖能力没有影响，证实miR-128对肺癌细胞的迁移及侵袭能力有抑制作用，提示miR-128有可能成为肺癌诊断治疗的新靶点，为提高肺癌诊断治疗水平以及改善预后带来了广阔的前景。