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[背景]食管癌是全球第七大常见恶性肿瘤,也是第六大癌症致死病因。目前,全世界约有超过57万的食管癌患者,其发病率仍在逐年上升。由于缺乏有效的早诊及治疗手段,其五年生存率极低。因此,发现新的早诊标志物分子、建立有效的治疗策略、提高患者的生存质量是食管癌研究领域迫切需要解决的问题。microRNAs(miRNAs)是一类长度为18-25个核苷酸的非编码小RNA。miRNAs通过抑制下游靶分子的翻译进而发挥其功能,这一过程在细胞的生理及病理过程中发挥着重要作用。前期,课题组检测了25例食管鳞癌患者的癌组织及癌旁组织中miR-210的表达水平,发现miR-210在食管鳞癌组织中表达降低,且低表达miR-210的食管鳞癌患者临床预后较差。但miR-210在食管鳞癌中的具体作用及分子机制尚不明确,本课题将对此展开深入研究。[目的]1.检测miR-210在食管鳞癌组织和细胞中的表达水平。2.探究miR-210对食管鳞癌恶性表型的影响。3.探讨miR-210影响食管鳞癌发生发展的分子机制。[方法]1.qPCR检测miR-210在食管鳞癌细胞及组织中的表达。2.构建miR-210的过表达和低表达慢病毒载体,合成miR-210 mimic和inhibitor。分别通过稳定转染或瞬时转染建立miR-210过表达和低表达的细胞模型及相应的对照细胞模型。3.通过CCK-8实验及平板克隆形成实验研究miR-210对食管鳞癌细胞增殖的影响;运用流式细胞仪检测miR-210对食管鳞癌细胞周期和细胞凋亡的影响;利用Transwell实验观察miR-210对食管鳞癌细胞侵袭和迁移的影响;通过裸鼠成瘤实验和裸鼠尾静脉转移实验观察miR-210对食管鳞癌细胞体内成瘤能力及体内转移能力的影响。4.联合生物信息学分析与全基因组表达谱芯片筛选miR-210的下游靶基因;通过qPCR、Western Blot及双荧光素酶报告基因实验验证miR-210的下游靶基因。5.探究miR-210调控食管鳞癌转移的相关分子机制。[结果]1.与正常食管上皮细胞系Het-1A相比,miR-210在食管鳞癌细胞系中低表达;与癌旁组织相比,miR-210在食管鳞癌组织中的表达降低。2.成功建立了过表达和低表达miR-210的食管鳞癌细胞模型。CCK-8实验及平板克隆形成实验表明miR-210能够抑制食管鳞癌细胞的体外增殖及克隆形成能力;Transwell实验表明miR-210能够抑制食管鳞癌细胞的体外侵袭和迁移能力;流式细胞检测发现miR-210可促进化疗药物ADR或VCR诱导的食管鳞癌细胞凋亡;同时,miR-210可抑制细胞周期进展;裸鼠成瘤实验及裸鼠尾静脉转移实验表明miR-210可抑制食管鳞癌细胞的体内生长及转移能力。3.通过基因芯片、生物信息学分析、qPCR、Western Blot、报告基因实验等方法证实ATG7为miR-210的下游直接靶基因。4.通过功能实验及分子生物学实验等证实miR-210可以通过抑制ATG7进而抑制自噬发生。通过挽救实验和机制研究发现miR-210可通过ATG7/Wnt/β-catenin通路抑制食管鳞癌的侵袭和转移。[结论]本研究明确了miR-210在食管鳞癌细胞和组织中处于低表达水平,提示miR-210表达降低可能与食管鳞癌的发生发展相关。此外,我们研究了miR-210在调控食管鳞癌恶性表型中所发挥的功能,结果表明miR-210在食管鳞癌中起到抑制细胞增殖、抑制细胞侵袭转移、促进化疗药物诱导的细胞凋亡等作用。同时,我们还发现miR-210对食管鳞癌细胞自噬具有调控作用,研究结果表明miR-210可以通过抑制ATG7表达进而抑制细胞自噬。最后,本研究提出并阐明miR-210可通过ATG7/Wnt/β-catenin通路抑制食管鳞癌的侵袭转移。本研究为深入了解miR-210在食管鳞癌恶性表型中发挥的作用与调控机制提供了理论依据,因此,miR-210有望成为食管鳞癌治疗中的新靶点。