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本文采用改进四引物PCR定点突变法和基因重组技术,构建了A链链内二硫键错接(A11Ser,A12 Cys)的胰岛素前体基因,利用pBV220作为载体,采用直接表达的方式,在大肠杆菌温度诱导的体系中,获得了稳定表达,表达产物以包涵体的形式存在。通过高密度发酵、表达产物的后加工和Sephadex G50分子筛柱层析分离纯化,得到了A链链内二硫键错接的Met-(A11Ser,A12Cys)-人胰岛素原(Mut-HPI)。以同样方法获得的Met-人胰岛素原(Met-HPI)为对照,研究了其理化性质和生物活性