吴茱萸五加叶中降血糖活性成分的研究

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吴茱萸五加(Acanthopanax evodiaefolius Franch)是我国特有的五加科(Araliaceae)五加属Acanthopanax Miq.植物,以其根皮作为“五加皮”入药,主要分布于我国长江流域以及长江以南地区,也是湖南五种五加属植物之一。文献记载吴茱萸五加的根皮具有祛风除湿、解毒消痛、清热泻火、理气化痰的作用,主治风湿痹痛、腰膝酸痛、水肿、跌打损伤、劳伤咳嗽、哮喘、吐血等。本论文首先对吴茱萸五加叶的水提物(WZY-WA)、甲醇提取物(WZY-ME)、石油醚萃取部分(WZY-PE)、乙酸乙酯萃取部分(WZY-EA)、正丁醇萃取部分(WZY-BU)的α-葡萄糖苷酶,α-淀粉酶的抑制活性、PTP1B酶的抑制活性、细胞毒性、抗氧化活性以及对RIN-m5F胰岛素释放的影响进行了研究,筛选出α-葡萄糖苷酶、PTP1B的抑制作用较好,细胞毒性低、抗氧化作用较好的的石油醚萃取物(WZY-PE)、乙酸乙酯萃取物(WZY-EA)为生物活性部位。以体外活性筛选结果为导向,对吴茱萸五加叶进行化学成分的研究,采用正反向柱层析、MCI凝胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析、聚酰胺柱层析、制备液相等方法及重结晶手段进行分离纯化,得到25个化合物,并应用1H-NMR、13C-NMR、DEPT等波谱技术和理化性质鉴定其结构,它们分别是柚皮苷(1)、樱桃苷(2)、待鉴定(3)、豆甾醇(4)、蒲公英萜醇(5)、胡萝卜苷(6)、待鉴定(7)、东莨菪苷(8)、芹菜素-7-O-新橙皮苷(9)、紫丁香苷(10),金丝桃苷(11)、clavane-2β,9α-diol(12)、大波斯菊苷(13)、麦芽酚(14)、4H-1-Benzopyran-4-one,3-(β-D-glucopyranosyloxy)-6,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-(15)、科罗索酸(16)、(±)-松脂素(17)、(+)-梣皮树脂醇(18)、phenol,2,6-dimethoxy-4-[tetrahydro-4-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1H,3H-furo[3,4-c]furan-1-yl]-,[1S-(1α,3aα,4β,6aα)]-(9CI)(19)、(±)-丁香脂素(20)、柚皮素(21)、麦芽酚3-O-β-D-葡萄糖苷(22)、6,8-Di-C-β-D-glucopyranosylapigenin(23)、ethylconiferin(24)、ethylsyringin(25)。其中,化合物1,2,5,89,1113,15,1720,2225首次从吴茱萸五加植物中分离得到;化合物1,2,9,12,13,15,19,2225首次从五加属植物中分离得到;化合物1,9,12,13,15,19,2225首次从五加科植物中得到。研究HPLC法同时测定吴茱萸五加叶中8个黄酮类成分的含量,结果表明在不同采收期吴茱萸五加叶中8种黄酮的含量各有不同,在6月和10月采集的吴茱萸五加叶中柚皮苷的含量最高,分别达到13.13mg/g、13.76mg/g,6,8-Di-C-β-D-glucopyranosylapigenin、芹菜素-7-O-新橙皮苷的含量次之;8月采集的吴茱萸五加叶中所有黄酮含量均较低。该方法流动相组成简单、分离效果好、简单、准确,可用于吴茱萸五加叶中黄酮含量的测定。与此同时采用聚酰胺树脂对吴茱萸五加叶中柚皮苷进行纯化工艺的考察,并利用响应面设计法对纯化工艺进行优化。得到的最优工艺条件为:上样液浓度为4.0 mg/ml,上样液体积为3.5 BV,洗脱体系为30%甲醇,洗脱剂用量为3.0 BV,洗脱流速为8.0 BV/h,按照最佳优化条件进行实验,柚皮苷含量可达到56.12%。说明响应面设计法优化聚酰胺树脂纯化吴茱萸五加叶中柚皮苷的工艺稳定、高效。在吴茱萸五加叶提取物及萃取物降血糖活性筛选的基础上对从中分离得到的柚皮苷、樱桃苷,科罗索酸进行了降血糖作用相关的活性实验。结果表明,科罗索酸对α-葡萄糖苷酶具有较好的抑制作用,科罗索酸5 uM(2.36 ug/mL)对α-葡萄糖苷酶的抑制率可达72.0%,而阳性对照药阿卡波糖(4.40 mg/mL)的抑制率为85%,结果表明科罗索酸对α-葡萄糖苷酶的活性具有强抑制作用,且科罗索酸同样对PTP1B酶具有较好的抑制作用且细胞毒性低,故科罗索酸具有较好的研究前景,对其进行降血糖作用的进一步研究是非常有必要的。而柚皮素和樱桃苷的一系列的降血糖活性均较低,对吴茱萸五加叶中其它化合物的降血糖活性有待进一步研究。
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