论文部分内容阅读
第一部分心外膜脂肪组织白色化对冠状动脉粥样硬化病变的影响目的：探讨心外膜脂肪组织白色化对冠状动脉粥样硬化病变的影响。方法：选取30只2月龄健康雄性新西兰大白兔随机分为两组,实验组(n=15)给予高脂饲料喂养,建立动脉粥样硬化模型：对照组(n=15)给予普通饲料喂养。分别于0、8、12周后禁食过夜,1.抽取两组兔的静脉血,检测血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)与高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平；2.ELISA检测血浆中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、瘦素(Leptin)、妊娠相关蛋白A (PAPP-A)、脂联素(Adiponectin)、可溶性E-选择素(sE-selectin)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平；3.麻醉后取兔的心外膜脂肪组织(EAT)、肩胛下棕色脂肪组织(sBAT)与附睾白色脂肪组织(eWAT), RT-PCR检测三种脂肪组织中解耦联蛋白-1(UCP-1)、瘦素、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA的表达；4.HE染色观察脂肪细胞形态、大小和数目；5.免疫组化行UCP-1、瘦素、CD31、巨噬细胞染色,并检测表达水平；6.电镜观察线粒体形态与数量；7.取兔的心脏,于前降支近段做横切面Masson染色,观察斑块形态,计算斑块面积。结果：1.实验组中0、8、12周血浆TG、TC、LDL-C与hs-CRP水平逐渐增高,而HDL-C水平逐渐降低,三组之间差异均有统计学意义(p<0.05)；对照组0、8、12周无明显统计学差异(p>0.05)。2.实验组中0、8、12周血浆中IL-6、TNF-α、瘦素、PAPP-A、sE-selectin、MMP-9水平逐渐升高,而脂联素水平逐渐降低,三组之间差异均有统计学意义(p<0.05)；对照组0、8、12周无明显统计学差异(p>0.05)。3.同放大倍数下,实验组中0、8、12周冠状动脉斑块面积逐渐增大,三组之间差异均有统计学意义(p<0.05)；对照组无明显统计学差异(p>0.05)。4.0周EAT与sBAT比较,UCP-1与PPARγ mRNA表达接近,并显著高于eWAT,而瘦素mRNA的表达显著低于eWAT,差异均有统计学意义(p<0.05)；实验组中0、8、12周EAT中UCP-1与PPARγmRNA的表达逐渐降低,而瘦素 mRNA的表达逐渐升高,三组之间差异均有统计学意义(p<0.05)；对照组0、8、12周无明显统计学差异(p>0.05)。5.免疫组化分析显示,实验组中0、8、12周EAT中UCP-1水平逐渐降低,新生血管数量显著减少,而瘦素与巨噬细胞水平逐渐增高,三组之间差异均有统计学意义(p<0.05)；对照组0、8、12周无明显统计学差异(p>0.05)。6.同放大倍数下,实验组中0、8、12周EAT脂肪细胞体积逐渐较大,数目逐渐较少,三组之间差异均有统计学意义(p<0.05)；对照组0、8、12周无明显统计学差异(p>0.05)。7.电镜观察显示,实验组中0、8、12周EAT脂肪细胞多嵴线粒体数量逐渐减少,三组之间差异均有统计学意义(p<0.05)；对照组0、8、12周无明显统计学差异(p>0.05)。结论：1.健康兔心外膜脂肪组织的细胞表型为棕色脂肪。2.动脉粥样硬化形成及进展的过程中存在循环炎症因子水平的升高。3.在冠状动脉粥样硬化的进展过程中,心外膜脂肪的细胞表型存在由棕色向白色的转变。4.冠状动脉粥样硬化斑块周围的心外膜脂肪组织中炎症因子的基因及免疫活性表达增加。5.全身性的炎症状态可促使心外膜脂肪组织的白色化。除了循环的炎症反应外,心外膜脂肪组织炎症状态可能参与或促进局部冠状动脉粥样硬化的发生与发展。第二部分IL-6通过激活JAK—STAT3通路诱导棕色脂肪细胞白色化目的：探讨IL-6诱导心外膜棕色脂肪细胞白色化的分子调控机制。方法：取2月龄健康雄性新西兰大白兔的心外膜脂肪组织,行棕色脂肪细胞原代培养。1.待棕色脂肪细胞分化成熟后,接种入6孔板中,并加入不同浓度IL-6(0、5、10、20、50、100ng/ml)孵育后,收集脂肪细胞抽提总RNA, RT-PCR检测UCP-1、瘦素、PPARγ及信号传导及转录激活因子3(STAT3)的mRNA表达。2.分化成熟的棕色脂肪细胞,接种入6孔板,加入同一浓度的IL-6 (100ng/m1),同时分别加入不同浓度的STAT3特异性阻断剂JSI-124 (0、0.5.1、2、5、10umol/L)孵育后,收集脂肪细胞抽提总RNA, RT-PCR检测UCP-1、瘦素、PPARγ及STAT3的mRNA表达。结果：1.随IL-6浓度的升高,棕色脂肪细胞中UCP-1与PPARγ的mRNA表达逐渐降低,而瘦素与STAT3的mRNA表达逐渐升高,差异均有统计学意义(p<0.05)。2.随JSI-124浓度的升高,脂肪细胞中UCP-1与PPARγ的mRNA表达逐渐升高,而瘦素与STAT3的mRNA表达逐渐降低,差异均有统计学意义(p<0.05)。结论：IL-6可通过激活JAK-STAT3通路诱导棕色脂肪细胞白色化。