【摘 要】
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目前对我国规模化养鸭场的耐药基因的流行情况尚不清楚。本研究针对养鸭场流行的不同类抗生素耐药基因,包括大环内酯类、万古霉素类、磺胺类、四环素类、氯霉素类、16S rRNA甲基化酶类、β-内酰胺类、氨基糖苷类、主动外排类和多黏菌素类,共10类38个耐药基因进行比较分析并设计引物。然后采集我国部分地区规模化养鸭场粪便并提取总DNA为模板,采用PCR结合测序的方法检测耐药基因的流行情况。耐药基因检测结果显
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目前对我国规模化养鸭场的耐药基因的流行情况尚不清楚。本研究针对养鸭场流行的不同类抗生素耐药基因,包括大环内酯类、万古霉素类、磺胺类、四环素类、氯霉素类、16S rRNA甲基化酶类、β-内酰胺类、氨基糖苷类、主动外排类和多黏菌素类,共10类38个耐药基因进行比较分析并设计引物。然后采集我国部分地区规模化养鸭场粪便并提取总DNA为模板,采用PCR结合测序的方法检测耐药基因的流行情况。耐药基因检测结果显示,不同类抗生素耐药基因的检出率分别是磺胺类（90.93%）、四环素类（74.38%）、氯霉素类（84.43%）、多黏菌素类（59.89%）、主动外排类（58.16%）、大环内酯类（76.47%）、β-内酰胺类（64.84%）、16S rRNA甲基化酶类（17.58%）、万古霉素类（9.34%）。样品MY、CQ、ZJ、AH、LN和HuN10类耐药基因均被检测出。所检测的耐药基因中mcr-1是目前新发现的介导耐多黏菌素类抗生素的最为重要的耐药机制之一,引发了全球的广泛关注。针对PCR检测mcr-1呈阳性的粪便样品,采用终浓度为100μg/mL的硫酸多黏菌素B麦康凯培养基进行筛选,获得含有mcr-1的大肠杆菌分离株,提取基因组和质粒DNA,采用PacBioRSⅡ第三代单分子实时测序完成全基因组的序列测定并进行生物信息学分析。结果显示mcr-1阳性大肠杆菌RCAD0514基因组大小为4,679,465bp,GC含量为50.76%,含有3个质粒,大小分别是123,510bp、87,297bp和60,954bp;GC含量分别是52.58%、51.02%、52.34%;基因组上含有50个耐药基因,三个质粒分别含有8、4和1个耐药基因,其中mcr-1在质粒pRCAD0514DY-3上。质粒分型结果显示质粒pRCAD0514DY-3是FⅡ型质粒。药物敏感实验和MIC测定结果表明mcr-1阳性大肠杆菌RCAD0514的耐药情况很严重,转化实验结果表明含有mcr-1的质粒pRCAD0514DY-3可转移到大肠杆菌DH5α中,转化率为3.49×10-8～1.7×10-7。综上所述,我国规模化养鸭场的耐药基因流行广泛,多重耐药普遍,并且首次从商品鸭群中分离出了质粒上含有mcr-1的大肠杆菌。
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