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人体的免疫功能分为先天和后天（获得）免疫。两者在发挥抗各种病原菌如细菌，寄生虫和病毒感染时，不同种类的淋巴因子具有重要的保护作用。正常情况下，病毒和细菌感染首先激活先天免疫，其次诱导Ⅰ型T细胞亚群。该T细胞认为是在IL-12的影响下，以抗原特异的方式被诱导的。细菌刺激活化天然免疫中的巨噬细胞和随后的NK细胞分别产生IL-12和IFN—γ，IL-12接着诱导NK细胞产生IFN—γ，IFN—γ依次又激活巨噬细胞将抗原提呈给抗原特异性T细胞，最终，天然免疫和与其相伴的抗原特异性T细胞反应共同将病原菌清除。所以IL-12对防御病原菌感染发挥了重要作用，并且是连接先天和后天免疫的关键分子。然而，IL-12的基因表达在某些感染如麻疹和利什曼原虫感染时却被抑制了。有报道疟原虫感染的红细胞抑制DC（Dendritic cells）的功能，并导致无法诱导Ⅰ型T细胞反应。在前期的研究中，我室曾报道了疟原虫感染鼠的腹腔渗出细胞（PEC）IL-12p40基因表达被抑制。这一观察促使我们去分析在疟原虫感染时诱导IL-12p40基因表达抑制的机制。分析IL-12p40基因表达的调节会使我们更好地利用病原菌感染时这一基因的作用。这将有利于预防和控制各种感染性疾病。中文摘要cells，PEC)，用RT一PCR的方法测定未感染和感染疟原虫（P. be几劝ez’）小鼠IL一12p4o的基因表达。实验结果表明:P. be几功ez’感染鼠的1L一12p4o的mRNA表达明显低于P. be几劝ez’未感染鼠的表达。为了方便比较某种因子在不同实验中mRNA的表达水平，我们用逐级稀释的IL一12p4o和p一aetin DNA片段（或含有IL一12p40和p一aetin靶序列的质粒pBlueseript）做模板，进行PeR扩增，PeR产物经电泳，成像后，用专门软件测定各带强度，最后以稀释浓度的对数为横坐标，各带的强度为纵坐标在半对数纸上做曲线。结果，两条直线基本平行。这样，可选择p一actin作为测定各因子mRNA表达的参照标准，既半定量RT一PCR。我们用这一方法也检测了P. be几劝ez’未感染鼠和P. be几功e1’感染鼠的IL一12p4o，IL一12p35的mRNA表达。发现，IL一12p35的mRNA表达未受感染影响。说明工L一1 Zp4o和工L一1 2p35的基因表达是被分别地调节。 第二部分 疟原虫（Pladz’姗beI.ghez’）感染鼠PEC细胞IL一12p40基因表达抑制机制的研究（1） —从PEC细胞水平的研究 为探讨P. be乓劝ez’感染鼠PEC细胞工L一12p40基因表达抑制机制，首先要了解是否PEC细胞吞噬了P. beZ若力e了感染的红细胞。用红内期的疟原虫经腹腔感染小鼠一天后的PEC细胞进行常规姬姆萨染色，并对其光镜下观察。发现只有少数PEC细胞吞噬了疟原虫感染的红细胞。 尽管疟原虫未直接感染PEC细胞，但PEC细胞却由于感染而深受影响。为了解哪种细胞与观察到的抑制有关，我们采用了细胞组合实验。将未感染和感染P.be了沙ez’的PEC细胞以不同比例组合，在组织培养板上培养24小时。贴壁的细胞进一步用LPS加工FN一Y刺激培养。然后，测定1L一12p4OmRNA的表达。结果表明:未感染和感染PEC以1:1比例混合后的工L一12p40mRNA的表达水平低于未感染和感染PEC组工L一12p40mRNA表达水平的平均值。说明性罗业经沸肚近故细胞间工L一12p4o基因表达的抑制韭用。中文摘要 由于AdPEC细胞在细胞间抑制作用中扮演了重要角色，因此有必要对AdPEC细胞表面分子作进一步分析。用EDTA处理贴壁的AdPEC细胞，并洗涤搜集。用抗CD 1 lb，eD 1 IC，CD4O，CDSO和CD86的FITC-结合的抗体染色后，用流式细胞仪分析。结果表明:多数AdPEC细胞是CDllb阳性，少数AdPEC细胞是CDlle阳性。这表明，多数AdPEC细胞是巨噬细胞，少数AdPEC细胞是树突状细胞（DC）。感染PEC表达的CD86分子高于未感染PEC。两种PEC细胞也表达CD4O，CDSO和CD86分子。CD4O和CDSO在两种PEC细胞表达水平接近，但CD86分子的表达在P. be增力ej感染的AdPEC细胞高于未感染的AdPEC细胞。 第三部分 疟原虫（Pladz’姗be乓功ez’）感染鼠PEC细胞IL一1 2p40基因表达抑制机制的研究（2） —从IL一12相关细胞因子及核因子水平研究 IL一12p40的表达受多种细胞因子及核因子的调节。我们采用半定量RT一PCR的方法对相关细胞因子工L一10、TGF一pl和TGF一解;核因子工RF一1和NF一KB的mRNA水平进行了分析。发现在P. be几劝ez’感染的PEC细胞，经LPS和IFN一Y刺激培养后，TGF一印和TGF一pZ表达受抑，TGF一即表达抑制更加明显。相反，P. bel爸的ez’感染的PEC细胞，经LPS和IFN一Y刺激培养后，工L一10的表达明显增强。由于LPS和IFN一Y刺激培养的PEC细胞工L一12p40基因的表达需要转录因子工RF一1和NF一KB，而诩0S的基因表达也需要工RF一1和NF一KB。因此，未感染和感染P. beZ勃ez’的PEC细胞的RT一PCR产物，在测定IL一12p4o，IL一10，TGF一pl和TGF一p 2 mRNA表达的同时，对iNOS和IRF一1 mRNA的表达进行了测定。结果表明:在未感染和P. be几劝ez’感?