【摘 要】
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该文在摇瓶实验中,采用正交设计法,优化适合基因重组人脑钠素十聚体（10hBNP）表达的最佳培养基组成为（g/L）：葡萄糖2、胰蛋白胨5、酵母粉5、NaCl 1、MgSO0.1、KHPO0.5.在上述培养基
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该文在摇瓶实验中,采用正交设计法,优化适合基因重组人脑钠素十聚体（10hBNP）表达的最佳培养基组成为（g/L）：葡萄糖2、胰蛋白胨5、酵母粉5、NaCl 1、MgSO<,4>0.1、KH<,2>PO<,4>0.5.在上述培养基中,接种量2﹪,37℃,转速170r/min下培养至菌体密度OD<,600>为1.0时,加入诱导剂IPTG使其在发酵液中浓度为0.5mmol/L进行诱导培养4h,诱导后培养温度为34℃,控制pH为7.0,溶氧DO为50﹪,得到10hBNP最大表达量为29.77﹪,菌体密度为3.28.对用乳糖取代IPTG作为诱导剂进行了初步研究,表明乳糖有利于菌体生长,但诱导效果低于IPTG.此外,还系统研究了10hBNP包含体的洗涤和溶解工艺,确定最佳洗涤工艺.在对10hBNP纯化实验过程中,采用固定化金属螯合亲和层析的方法,结果表明,采用咪唑梯度法,并在杂蛋白洗脱缓冲液中加入16mmol/L咪唑和20﹪乙醇,可进一步纯化产物的纯度,使之达到94.31﹪,收率约为38.9﹪.
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