研究背景由于肾移植外科技术的日臻完善及新型免疫抑制剂的临床应用，移植肾的短期存活率显著提高，但是移植肾的长期存活率并没有明显改善。慢性移植肾病(chronicallograftnephropathy,CAN)是导致移植物晚期失功(移植一年以上)的主要原因，大约50％的移植肾功能丧失由CAN而致，因此，如何防治CAN而改善移植肾的长期预后成为肾移植界研究的热点。 近期研究发现多种免疫性和非免疫性因素参与了慢性移植肾病的发生，但有关慢性移植肾病的发病机制尚不清楚。已知单个核细胞浸润、血管平滑肌细胞向内膜移行和增殖是慢性移植肾病早期病理变化中两个关键环节。而在肿瘤、妇产科疾病等其他疾病的研究中发现，MMPs/TIMPs与炎症细胞、血管平滑肌细胞、肿瘤细胞等浸润和迁移的发生机制有关。CAN后期肾组织发生纤维化，其本质是ECM在肾小球和间质的异常堆积，导致肾毁损，有效肾单位丧失，肾功能进行性下降。已知ECM堆积是由于合成增加、降解减少或二者共同作用的结果，基质金属蛋白酶是ECM降解的关键酶类。因此推测MMPs可能参与了慢性移植肾病的发生发展。 正是由于单个核细胞浸润是CAN早期病理改变突出特征之一，而炎症细胞浸润及其活化需要趋化因子的参与，提示我们有必要研究RANTES和MCP-1在CAN发病机制中的作用。 实验方法1.实验设计：分移植组(40只)、F344对照组(25只)、Lewis(25只)对照组三组，每组分别于4周、8周、12周、16周和24周收获动物，移植组每次收获8只、对照组每组每次收获5只。 2.利用显微外科技术制作大鼠慢性移植肾病动物模型，观察其功能学变化和形态学变化。 3.应用免疫组化技术、逆转录聚合酶链反应检测慢性移植肾病大鼠发病不同时相肾组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2基因和蛋白水平的表达，探讨其表达变化与慢性移植肾病的关系。 4.应用免疫组化技术检测大鼠慢性移植肾病进展各时间点RANTES和MCP-1的表达，并观察其与MMPs/TIMPs表达的关系。 5.应用RT-PCR技术检测肾移植高脂血症患者外周血RANTES及其受体CCR5mRNA的表达，探讨其与高脂血症的关系。 结果1.成功建立大鼠CAN模型：移植组24h尿蛋白定量从移植16w开始明显增高，与该时间点对照组相比差异有显著意义；16w后移植组各时间点尿蛋白定量均显著高于前一时间点；CAN早期(4周)以单个核细胞浸润为主；16w后纤维化逐渐明显。 2.移植组MMP-9蛋白及mRNA表达水平在慢性移植肾病早期(4w)均增高，16w和24w时表达水平减低。TIMP-1蛋白及mRNA表达水平在4w减低，12w以后增高。MMP-9/T1MP-1比值在慢性移植肾病早期(4w、8w)增高，12w开始降低。 3.移植组MMP-2蛋白和mRNA表达水平在4w、8w时减低，12w后回复，但与同组相比16w以后再次减低。TIMP-2蛋白和mRNA表达水平在16w以前均增高，24w与同组相比水平减低。MMP-2/TIMP-2比值在CAN各时相均减低，但与同组相比16w后呈减低趋势。 4.移植肾组织RANTES表达在移植后12w增高，然后降低。 5.移植肾组织MCP-1表达在移植后4w、8w、12w显著高于F344对照组，16w、24w显著低于F344对照组。 6.蛋白水平RANTES、MCP-1的表达与MMPs/TIMPs系统密切相关。 7.血脂正常组和血脂增高组外周血RANTES及其受体CCR5mRNA表达水平都显著增高，血脂增高组表达水平又明显高于血脂正常组。辛伐他汀治疗后RANTES和CCR5mRNA表达水平显著降低。 结论1.本研究成功建立了慢性移植肾病大鼠模型并以此进行慢性移植肾病发病机制的研究。 2.移植后早期增高的MMP-9表达水平以及MMP-9/TIMP-1比值，参与CAN早期单个核细胞浸润发病机制；后期减低的MMP-9表达水平以及MMP-9/TIMP-1比值，参与CAN后期纤维化发生机制。 3.移植后早期MMP-2表达水平以及MMP-2/TIMP-2比值减低，后期(16w)以后有再次减低趋势，不提示MMP-2表达水平以及MMP-2/TIMP-2比值变化与CAN早期单个核细胞浸润的加重有关，但提示其可能参与CAN后期纤维化发生机制。 4.RANTES在CAN病程的中的表达呈逐渐升高后又减低的过程，移植12周为其表达高峰，提示其可能在CAN由早期病变向晚期病变的转化中发挥作用。 5.移植肾组织MCP-1表达在移植后4w、8w、12w增高，然后降低，提示其可能在CAN早期病变发生机制中发挥作用。 6.在CAN大鼠模型中，RANTES及MCP-1可以和MMPs/TIMPs系统相互作用；MCP-1可能是CAN大鼠模型中刺激MMPs表达和MMPs/TIMPs增高的因素之一。 7.肾移植后外周血中RANTES和CCR5mRNA表达水平上调，高脂血症患者更加明显，且发生在CAN临床表现出现之前，从临床角度进一步提示RANTES可能在CAN早期病变发生机制中发挥作用。