【摘 要】
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睡眠是一项人体必需的生理活动,可以解除疲劳,恢复精神,而睡眠问题会影响人体健康。近年来,治疗睡眠问题仍采用药物治疗和保健食品改善,而长期服用治疗失眠的药物会导致药物成瘾等副作用。牡蛎是我国人工养殖的主要经济贝类之一,富含人体所需营养物质,还是活性物质研究的重要资源。并且,《伤寒论》记载表明,柴胡加龙骨牡蛎汤能起到镇静安神的作用。所以,本文以香港牡蛎(Crassostrea hongkongensi
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睡眠是一项人体必需的生理活动,可以解除疲劳,恢复精神,而睡眠问题会影响人体健康。近年来,治疗睡眠问题仍采用药物治疗和保健食品改善,而长期服用治疗失眠的药物会导致药物成瘾等副作用。牡蛎是我国人工养殖的主要经济贝类之一,富含人体所需营养物质,还是活性物质研究的重要资源。并且,《伤寒论》记载表明,柴胡加龙骨牡蛎汤能起到镇静安神的作用。所以,本文以香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)为原料,采用可控酶解技术制备得到牡蛎酶解产物,通过动物实验验证、筛选最佳改善睡眠活性组分,并开发改善睡眠产品,为其后续机理研究及相关功能产品开发提供理论依据和实践方向。本论文研究内容和结果如下:(1)采用动物蛋白酶制备牡蛎酶解产物(EPO),测定其基本理化成分;以灌胃给药的方式,通过直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验等动物行为学实验及测定小鼠脑内抑制性神经递质和兴奋性神经递质含量进行改善睡眠效果评价。结果表明,EPO分子量分布主要集中在<3 KDa范围内,蛋白含量为56.83%,且氨基酸组成、矿物质元素组成丰富;与阴性对照组相比,EPO无直接睡眠作用,EPO主要通过延长睡眠时间,提高睡眠发生率,缩短睡眠潜伏期,提高小鼠脑内GABA、5-HT、MT三种抑制性神经递质的含量,降低DA、NE两种兴奋性神经递质的含量,从而达到改善睡眠的作用。因此,本研究继续采用灌胃给药的方式,通过动物实验及神经递质含量、神经细胞标志物蛋白表达等生理生化指标进行下一步的改善睡眠最佳活性组分筛选及机制初探。(2)将牡蛎酶解产物(EPO)通过超滤分级得到<3 K、3-5 K、>5 K三个超滤组分,并测定其基本理化成分;通过小鼠体重实验、脏器系数实验进行超滤组分的安全性验证;继续采用动物行为学实验进行改善睡眠活性评价及组分筛选;通过测定小鼠脑内神经递质含量和GFAP表达进行其改善睡眠机制初步探究。结果表明,<3 K、3-5 K、>5 K三个组分分子量分布主要集中在<3 KDa范围内,蛋白含量高(分别为67.48%、72.45%、65.92%),氨基酸种类齐全,富含与睡眠有关的锌、铁、镁等矿物质元素;UEPO对小鼠体重及脏器系数无影响;行为学方面,三个超滤组分均无直接睡眠作用,UEPO可以延长睡眠时间,提高睡眠发生率,缩短睡眠潜伏期;神经递质含量方面,UEPO可以提高小鼠脑内GABA、5-HT抑制性神经递质的含量,降低DA、Glu兴奋性神经递质的含量;UEPO还可以显著抑制脑内GFAP的表达。综合对比,筛选得到<3 K组分改善睡眠效果最佳。因此,本研究将围绕<3 K组分进行改善睡眠产品的初步研发。(3)以牡蛎酶解产物<3 K组分为主料,选择具有改善睡眠功能的酸枣仁,百合,蜂蜜粉进行复合配比,并通过响应面实验优化得到风味和稳定剂最佳复合配比。配方优化结果:5.00%<3 K牡蛎酶解粉,1.00%酸枣仁粉,1.00%百合粉,1.00%蜂蜜粉、7.00%苹果粉、0.40%甜菊糖苷、2.00%β-环状糊精,0.15%黄原胶,0.10%果胶,0.20%CMC-Na。在此优化条件得到的产品清香怡人,质地均匀,无沉淀颗粒,重金属含量及微生物含量符合国家食品标准。
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