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本文研究了绿色荧光蛋白(GFP)基因标记在微生物采油中的应用,具体的研究结果如下:
利用重组DNA技术成功构建了含有GFP基因的重组表达质粒pET-30a(+)-EGFP,利用CaCl<,2>法成功转化GFP基因标记JD菌。IPTG的诱导表达可以使JD(gfp)工程菌的绿色荧光的表达量达到荧光显微镜的检测标准。单独培养,考察了JD(gfp)工程菌胞体内重组质粒和荧光表达的稳定性,以及外源基因对其代谢多糖的影响。在含有Km终浓度50μg/mL的培养条件下,重组质粒在JD工程菌体内传代稳定,绿色荧光的表达稳定。在没有选择压力的培养条件下,重组质粒在JD工程菌胞体内有丢失现象。JD(gfp)工程菌的多糖代谢产量比野生JD菌的减少,但优化培养基后可提高多糖产量。与野生菌混合培养,JD(gfp)工程菌具有很好的配伍性和竞争性,并且不发生重组质粒的水平转移,在环境中释放是安全的。
研究结果表明:GFP基因可以标记驱油优势菌用于MEOR的研究。