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呱氨托美汀（Amtolmetin guacyl，AMG）是一种新的非甾体抗炎药（Nonsteroidalanti-inflammatory drug，NSAID），1993年在意大利研制成功并上市，2001年在美国成功上市，目前国内尚未上市。AMG的代谢产物为MED5和托美汀（Tolmetin，TOL）。AMG及其代谢产物MED5，TOL均具有抗炎、镇痛作用。AMG是非选择环氧化酶（Cyclooxygenase，COX）抑制剂，通过抑制前列腺素（Prostaglandins，PGs）合成发挥较强抗炎镇痛作用。 本课题利用不同动物疼痛模型探讨AMG在外周和中枢镇痛作用及其作用机制。研究NO在外周和中枢水平对AMG镇痛作用的影响，AMG对nNOS和c-Fos蛋白表达影响。通过AMG对胃黏膜上皮细胞释放NO影响及其抗氧化作用研究，探讨AMG胃粘膜保护作用及其机制。主要内容如下： 1 AMG镇痛作用 AMG(75，150与300mg·kg-1)对小鼠热水缩尾疼痛、热板疼痛、醋酸扭体疼痛、福尔马林疼痛的第二时相具有明显的镇痛作用。AMG(50，100与200mg·kg-1)对大鼠福尔马林致痛模型第二时相疼痛具有明显的镇痛作用。AMG(50，100与200mg·kg-1)对大鼠慢性坐骨神经结扎（chronic constriction injury，CCI）疼痛有明显镇痛作用，并且随剂量增加AMG镇痛作用增强。提示AMG具有明显外周和中枢镇痛作用且呈剂量依赖性。 2 AMG镇痛作用机制安徽医科大学博士学位论文2.1 AMG的抗氧化作用 枷Gig（75，150，300mg·kg-‘）不仅降低从致痛小鼠升高的血清MDA含量而且提高其下降的血清SOD活性，提示AMG可能通过抗氧化发挥镇痛作用。2.2 NO对AMG镇痛调控作用 热板、FA，AA诱导疼痛模型组的脊髓和脑组织匀浆上清液、血清N02一含量和正常对照组比较明显升高（尸<0.05，尸<0.01）。结果表明热板、FA，AA致痛模型组对NO有显著影响，其中AA致痛模型对NO影响最明显。AMG（150，300mg·k扩）明显降低AA疼痛模型小鼠脊髓和脑组织上清液Nos及NO2.含量。 AMG+L一Aig组与AMG组比较小鼠巧min内扭体次数显著增多（尸<0.05），而AMG+LNAME组与AMG组比较小鼠15min内扭体次数显著下降（尸<0.05），提示L-Aig可能存在拮抗，而LNAME有协同作用。LAig和LNAME可能对AMG镇痛作用有一定影响。AMG，LNAME，AMG十L-NAME组明显降低脊髓和脑组织上清液N02一含量，而LAig，AMG+L一Aig+LNAME明显提高脊髓组织上清液NOZ一含量。 与AMG组比较AMG+LNAME组FA致痛第二时相小鼠累计舔足时间显著减少，而AMG+LArg组FA致痛第二时相小鼠累计舔足时间显著延长（尸<0 .05）。表明LAig降低AMG的镇痛作用，而LNAME却增加AMG的镇痛作用，因此AMG可能通过调控中枢和/或外周 NOS活性与NO释放发挥镇痛作用。 免疫组织化学染色显示nNOS阳性神经元为胞浆棕色深染而胞核兰色浅染;c一Fos阳性神经元为胞核呈棕褐色深染与胞浆浅棕色浅染。AMG（100，200 mg .kg一，）组脊髓和脑nNOS与c一FoS阳性神经元明显少于模型组;平均光密度明显降低，AMG明显抑制脊髓和脑组织nNOS与c一Fos阳性表达。提示AMG可能通过抑制脊髓和脊髓上nNOS和c一Fos表达发挥镇痛作用。 RT一pCR表明AMG（50，100，200 mg·kg一‘）明显抑制队致痛大鼠脊髓nNosmRNA表达。westem一blot也提示AMG（50，100，200 mg·kg一，）同样明显抑制FA致痛大鼠脊髓nNOS蛋白表达。进一步提示AMG可能通过抑制脊髓nNOS的活性发挥其脊髓或脊髓上镇痛作用。安徽医科大学博士学位论文2.3 AMG对大鼠CCI血液、脊髓与脑组织TNF一Q的影响 ToL（60 mg·kg-‘）与AMo（50，100，200 mg·kg一‘）明显降低升高的血清翎F-。含量，AMG（100，2 00 mg·k扩）明显降低升高的脊髓和坐骨神经匀浆上清液TNF一a水平。提示AMG可能抑制血清、脊髓和坐骨神经的TNF一Q水平发挥外周和中枢镇痛作用。2.4 AMG对大鼠CCI血液、脊髓与脑组织PGEZ的影响 拍L（60 mg·kg一‘）与AMG（50，100，200 mg·kg‘）明显降低升高的血清PoEZA值，AMG（100，200 mg·ks-l）明显降低升高的脊髓和坐骨神经匀浆上清液PGEZA值。提示AMG可能抑制血清、脊髓和坐骨神经的PGE:的释放发挥外周和中枢镇痛作用。3AMG对胃粘膜保护作用 AMG（75，150，300 mg·k扩）组连续给药7d后体重增加明显。AMG分别以（75，150，300 mg·kg-，）剂量连续给药7d，胃损伤评分结果与正常对照组比较差异无显著性。与模型组比较AMG（75，150，300 mg·kg一，）对乙醇诱导胃损伤指数明显减小（尸<0.05）。整体图象显示AMo（75，150，300 mg·kg一，）组乙醇诱导胃粘膜未见明显出血灶，充血明显减轻。光镜显示AMG（75，150，3 00 mg·kg.，）组乙醇诱导胃粘膜上皮细胞与壁细胞损伤较轻。电镜显示AM以巧0，300 mg·kg一，)组乙醇诱导胃粘膜的微绒毛大部分完整，排列尚整齐，仅少量缺损、短小。表明AMG对胃粘膜损伤有明显保护作用。4AMG胃粘膜保护作用机制 与模型组比较，AMG（75，150，300 mg·k扩）显著提高胃组织匀浆上清液的NOZ一与Nos含量;AMG（150，300 mg·k扩）明显降低升高的胃组织匀浆上清液MDA含量，而显著提高下降的SOD含量。表明AMG可能通过增加胃粘膜上皮细胞NOS活性，促进NO释放和抗氧化作用发挥