硒与苜草素在参与调节机体免疫功能中具有重要作用。缺硒会带来机体lg合成功能、淋巴细胞的增殖与分化能力等下降,过量补硒可造成细胞免疫和体液免疫水平下降。而苜草素在生长周期长的情况下应用效果更加理想。前期我们研究发现,酵母硒与苜草素配伍比单独添加酵母硒或者苜草素更能显著提高蛋硒含量、蛋鸡产蛋率及机体抗氧化能力,但两者配合使用是否会对动物机体的免疫效果产生影响未见报道。因此,本试验在前期研究的基础上,研究苜草素与不同梯度酵母硒配伍对产蛋后期蛋鸡肝、脾脏细胞凋亡和免疫功能的影响,旨在为提高产蛋后期蛋鸡的免疫性能及蛋鸡产业可持续发展提供理论依据和技术支持。试验选用432只69周龄健康海兰褐蛋鸡,随机分成4个处理组,每组6个重复,每重复18只鸡。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加1000mg/kg的苜草素与不同梯度的酵母硒(0.2、0.6、1.0mg/kg),预饲2周,试验期8周。采用HE染色、TUNEL法、ELISA分析、实时荧光定量PCR的方法,研究其对产蛋后期蛋鸡肝、脾脏细胞凋亡和免疫功能的影响。结果表明:(1)HE染色发现,苜草素与不同梯度酵母硒配伍可以改善肝脏脂肪变性、肝索排列紊乱,改善脾脏大量出血、红髓和白髓界限不清症状;显著提高空肠绒毛高度、V/C值(P<0.05),显著降低隐窝深度(P<0.05)。(2)苜草素与不同梯度酵母硒配伍对蛋鸡血清IgA、IgG、IgM无显著影响(P>0.05),但有上升趋势。(3)苜草素与不同梯度酵母硒配伍可以显著降低蛋鸡肝脏、脾脏的细胞凋亡率及Caspase-3 mRNA 的表达量(P<0.05)。(4)苜草素与不同梯度酵母硒配伍对蛋鸡肝脏、脾脏TNF-a、NF-kB、IL-6 mRNA表达量及蛋白表达水平无显著差异(P>0.05),但有降低趋势;添加0.6 mg/kg酵母硒和1000mg/kg苜草素,肝脏IL-2mRNA表达量极显著提高(P<0.01),蛋白表达水平显著提高(P<0.05),脾脏IL-2mRNA表达量与蛋白表达水平极显著提高(P<0.01);添加0.2mg/kg酵母硒和1000mg/kg苜草素,肝脏IL-4mRNA表达量显著提高(P<0.05),脾脏IL-2mRNA表达量显著提高(P<0.05),蛋白表达水平极显著提高(P<0.01)。综上所述,日粮中添加苜草素与酵母硒可以减少肝、脾脏的损伤及细胞凋亡率,抑制其促凋亡因子、促炎症因子的表达,提高抗炎因子的产生,增强机体免疫功能。在基础日粮0.2 mg/kg酵母硒基础上以添加1000 mg/kg苜草素与0.2-0.6 mg/kg酵母硒组合效果较好。