【摘 要】
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鸡的主要组织相容性复合体是指鸡16号染色体上的一组紧密连锁、高度多态的基因群。几乎所有有核细胞表面都表达主要组织相容性复合体I类分子(MHC Ⅰ)。MHC Ⅰ类分子是由跨膜
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鸡的主要组织相容性复合体是指鸡16号染色体上的一组紧密连锁、高度多态的基因群。几乎所有有核细胞表面都表达主要组织相容性复合体I类分子(MHC Ⅰ)。MHC Ⅰ类分子是由跨膜糖蛋白重链α和轻链β2m微球蛋白以非共价键结合而成的二聚体。MHC I类基因(BF基因)负责对重链α编码,成熟的α链分子质量约为44kDa。本研究以原核表达并纯化的BF蛋白免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,加强免疫3天后取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA筛选杂交瘤细胞,经过2-3次亚克隆,最后获得2株效价较高的BF特异性单克隆抗体,分别命名为1F12和3C10,重链均为IgM,轻链为K链,将1F12和3C10杂交瘤细胞分别接种8周龄BALB/c小鼠,制备腹水。Western Blot实验结果表明制备的单抗与未诱导的菌种不发生反应,只与相应的重组蛋白反应,显示出良好的特异性。利用截短表达的方式鉴定1F12针对的表位位于p66-Q83。鸡BF单克隆抗体的制备,为进一步研究BF在免疫学中的功能提供了有用的实验依据。本研究利用中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽类实验动物种子中心培育并保存的MHC单倍型鸡BW/G1、BW/G2、BW/G3、BW/G6和BW/G7 5个品系,包括MHCB复合体的B4、B15、B2、B21和B19型。根据NCBI上公布的不同单倍型鸡的BNK基因序列,比较不同单倍型鸡的BNK序列,发现不同单倍型鸡的生物学分析结果与标准单倍型序列一致。由此说明,BNK基因对MHC单倍型鸡的遗传稳定性监测提供了实验依据。本研究为建立MHC单倍型SPF鸡群的重要性提供了科学依据,为了解鸡MHC遗传变异与抗病性的关系奠定了基础,同时为进一步研究不同单倍型鸡的生物学功能提供了实验依据。
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