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研究目的卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤,发病率仅次于宫颈癌和子宫内膜癌,而死亡率居首位,由于缺乏特异的早期症状和有效的早期检测策略,加上腹腔种植转移早,尽管外科手术和辅助治疗有所发展,患者的五年生存率并没有显著提高。因而,探索卵巢癌早期诊断标志物和新的靶向药物治疗是目前研究的热点。中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)和金属基质蛋白酶9(matrix metal oproteinase-9,MMP-9)主要来源于肿瘤相关中性粒细胞,是近年各类肿瘤研究中较热门的酶类,研究证实其与多种肿瘤增殖、侵袭及转移密切相关,而其作为主体直接参与卵巢癌细胞脱落、侵袭转移的机制尚未完全阐明。本实验主要检测NE、MMP-9对体外卵巢癌细胞膜蛋白E-钙粘蛋白、MUC16表达的影响,探讨中性粒细胞相关蛋白酶在卵巢癌侵袭转移中的作用,为临床上相关蛋白酶靶向药物的设计与应用提供理论基础。研究方法体外培养人卵巢癌OVCAR3细胞。温控4℃,MMP-9、NE、0.125%胰蛋白酶分别处理OVCAR3细胞,光镜下观察不同时间段细胞形态学变化;采用蛋白质印迹(Western-blot,WB)检测OVCAR3细胞中E-钙粘蛋白、MUC16总体表达;免疫荧光技术明确E-钙粘蛋白、MUC16的定位。应用酶联吸附测定技术(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)定量培养基中脱落的MUC16胞外段蛋白。研究结果光镜观察结果显示:NE、MMP9处理细胞后,细胞形态由平铺鹅卵石样呈细长/纺锤状,细胞间逐渐分离、扩散;WB结果显示:NE、MMP9处理24小时后E-钙粘蛋白表达均显著下降,与对照组相比差异有统计学意义(p<0.05),而0.125%胰酶组与对照组之间差异无统计学意义;免疫荧光检测结果检测E-钙粘蛋白、MUC16主要定位在细胞膜上;ELISA结果显示:MMP-9处理细胞后,上清中MUC16胞外段CA125的含量明显增高。结论中性粒细胞相关蛋白酶NE、MMP9诱导细胞形态由平铺鹅卵石样呈细长/纺锤状,细胞间逐渐分离、扩散。两者可能通过酶解卵巢癌细胞膜上E-钙粘蛋白,促进上皮间叶转换,细胞接触和极性的丧失,细胞向侵袭性表型转化,促进卵巢癌细胞腹腔内种植转移。此外,MMP-9可以降解细胞膜上MUC16蛋白,使MUC16胞外段脱落,揭示局部MMP-9酶浓度升高与血清学CA125水平有一定关联。