目的:杜仲(Eucommia ulmoids Oliv.),为杜仲科落叶乔木植物,味甘,性温,无毒。素称“木棉”,在我国已有2000多年悠远的历史,是一种传统的中药材。杜仲属于我国珍稀濒危物种,大多数是以树皮入药,皮的生长较为缓慢,但往往剥皮树死,给中药资源的保护带来很大不便。叶相对皮而言较多且容易采摘,所以近些年来不少的国内外学者对杜仲叶有了进一步深入的开发、研究。干燥后的杜仲叶与皮有着相似的化学成分与药理功效,2005年开始被《中国药典》所收载:微辛温,归肝、肾经,具有补肝肾、强筋骨的功效。过度摄入乙醇会对身心健康造成严重影响,会增加自由基,改变体内生物酶的活性,同时也会损伤中枢神经系统,引发细胞毒性反应,使大脑抑制的功能减弱,进而出现自控力、记忆力和理解能力减弱的症状。现在国内外学者对乙醇引起DNA损伤的研究很多,而杜仲叶对酒精致脑组织损伤的保护作用研究尚少。因此,本实验以杜仲叶为研究对象,研究其对酒精致小鼠脑组织的保护作用。方法:本实验以昆明小鼠为实验对象,分五组:空白对照组,阳性对照组,高、低剂量组以及模型组。高、低剂量和阳性对照组连续给药三天,在第三天,给药半小时后灌胃给予乙醇(6g/kg),而空白对照组和模型组灌胃给予相应体积的0.5%CMC-Na溶液,四小时后全部脱臼处死。通过单细胞凝胶电泳法(彗星实验)筛选杜仲叶95%醇提物、50%醇提物和水提物对乙醇所致小鼠脑区DNA的损伤保护作用。采用酶联免疫方法和比色法检测杜仲叶粗提物对乙醇引起小鼠小脑、大脑皮层、血浆以及肝组织氧化损伤相关生理指标的影响,如NO(一氧化氮)、MDA(丙二醛)和8-OHDG(8-羟基脱氧鸟苷)的含量,T-SOD(总超氧化歧化酶)、GSH-PX(谷胱甘肽过氧化物酶)活性,NQO1(醌氧化还原酶1)水平以及ChAT(胆碱乙酰转移酶)的活力。据文献报道,杜仲叶中含有较多抗氧化作用的多酚类成分,所以采用福林酚比色法,测定活性最强的杜仲叶50%醇提物中总多酚的含量。结果:在彗星实验阶段,用相关的专业软件分析后,发现溶剂不同提取物抗氧化的效果也有所差异,50%醇提物的效果最好。以50%醇提物给药后检测小鼠脑区、血浆或肝脏组织中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、醌氧化还原酶1(NQO1)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)等各项生化指标。结果显示,给药后小鼠脑区、血浆和肝组织的抗氧化能力总体趋势相同,但呈现出明显的量效关系。50%醇提物可降低脑组织、血浆和肝脏组织中NO、8-OHDG等的含量,可有效提高GSH-PX、NQO1和T-SOD的活性,说明醇提物可以提高整个机体抗氧化的能力,从而全面抑制自由基损伤组织细胞,减少过氧化产物的生成,达到保护DNA的功效。本实验主要是采用维生素E作为阳性对照,发现杜仲醇提物和维生素E一样都具有增强机体耐受力和清除机体内自由基的作用,从而保护脑组织DNA免受氧化损伤。采用FC(福林酚)比色法来测定杜仲叶50%醇提物中总多酚的含量为61.6%,说明在保护DNA和抗氧化作用中总多酚类成分发挥极其重要的作用。结论:乙醇急性给药可产生较强的神经毒性,加快自由基地生成,使机体抗氧化物质的生成减少,同时诱导细胞的凋亡。通过多种试剂盒的检测发现乙醇对机体内的一些生理指标造成影响,使某些氧化指标NO、MDA等含量上升,抗氧化指标如T-SOD、GSH-PX和NQO1等酶活力下降。由实验发现,杜仲叶醇提物可以清除自由基,减少DNA损伤,增强T-SOD、GSH-PX和NQO1等酶活力,有效抑制过氧化,起到神经保护的作用。